一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的方法技术

一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的方法，用开心胶囊治疗，复制心肺复苏模型，在自主循环恢复180min后处死动物，摘取心脏；提取心肌组织总RNA，采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测目的基因的信使核糖核酸(mRNA)表达强度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的的方法，具体地说是一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的的方法。
技术介绍
目前公知的心肺复苏后细胞因子的变化，最终可引起自身的免疫失控，导致全身炎症反应综合征（SIRS）的发生，在这种状态下，自身免疫失控所导致的损伤远远大于心肺复苏的损伤作用，是继发多器官衰竭（MODS）的重要原因。
技术实现思路
诊断标准：1.研究对象：A.材料与仪器TKR300CG电脑射流供氧呼吸器（江西特力麻醉呼吸设备公司）；ID80普通成人用气管插管（浙江大学医疗医学仪器厂）；组织RNA抽提试剂盒（德国Invisorb公司）；OnestepRTPCRKit（大连宝生物工程公司）；PRB322DNA/MSPIMarkers（华美生物工程公司）；PerkinElmerGeneAmpPCRSystem2400；BeckmanAllegra64R台式高速冷冻离心机；DYY8B型稳压稳流电泳仪（北京市六一仪器厂）；2FAI紫外透射分析仪（上海光明仪器厂）；BeckmanDU640核酸紫外分析仪；凝胶成相分析系统（美国Laconco公司）。B.方法动物选用健康杂种犬15只，体质量13～15kg，年龄2～3岁，雌雄不限，用30g/L戊巴比妥钠（1mL・kg-1）腹腔注射麻醉，气管插管。分组所有动物随机分为3组，每组5只。其中假手术组仅行开胸假手术处理；模型组开胸致颤后常规复苏；开心胶囊组实验前以开心胶囊（每粒045g，本院制剂室提供），按给药剂量01g/kg加生理盐水混匀稍加热成稀糊状，拌入犬当日一部分饲料中，为保证给药准确性，在犬吃完含中药的饲料后再添加剩余的饲料，连续喂养5d后供实验用。开胸致颤后常规复苏，复苏后不使用任何血管活性物质。模型复制与复苏于胸骨左侧第5肋间开胸，至隐约可见到胸膜时，即接电脑射流供氧呼吸机行高频射氧通气；剪开心包，缝制简易心包吊床，暴露心脏，以低压交流电（3V、25mA、01s）诱发室颤，同时停止机械通气；持续4min后，恢复机械通气，直至自主循环建立；在恢复自主循环180min后放血处死动物，迅速摘取心脏。C.结果：模型组Toll样受体4（TLR4）和肿瘤坏死因子α（TNFα）mRNA的表达与假手术组比较有显著性差异（Ｐ＜００５）；开心胶囊组心肌组织TLR4mRNA、TNFαmRNA和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达受抑制，与模型组比较有显著性差异（Ｐ＜００５）。专利技术目的：Toll样受体（Tolllikereceptor，TLR）4，即TLR4作为跨膜受体在细菌内毒素介导的单核吞噬细胞免疫和炎症反应中发挥了重要作用；而肿瘤坏死因子α（TNFα）与SIRS发病和死亡关系最密切，诱生型一氧化氮合酶（iNOS）在炎症时高度表达，催化NO（nitrioxide）大量合成，在SIRS的病理过程中发挥着广泛而复杂的作用。本实验采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法，观察开心胶囊(由西洋参、香附、苍术、川芎、山栀、五灵脂、蒲黄、神曲、山楂等组成)对TLR4、TNFα和iNOS的的信使核糖核酸（mRNA）表达的调节作用。技术方案：方法选用健康杂种犬15只，随机分为假手术组、模型组和开心胶囊组，每组5只；复制心肺复苏模型，在自主循环恢复180min后处死动物，摘取心脏；提取心肌组织总RNA，采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测目的基因的信使核糖核酸(mRNA)表达强度。专利技术有益效果：模型组Toll样受体4（TLR4）和肿瘤坏死因子α（TNFα）mRNA的表达与假手术组比较有显著性差异（Ｐ＜００５）；开心胶囊组心肌组织TLR4mRNA、TNFαmRNA和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达受抑制，与模型组比较有显著性差异（Ｐ＜００５）。开心胶囊可能通过阻断或减弱免疫炎症因子基因的诱导，在一定程度上减轻复苏引起的心肌细胞的损伤。最佳实施方式：进行干预治疗。创新之处：本项新型专利技术专利涉及一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的方法，心肺复苏后由于机体启动了炎症反应系统如激活中性粒细胞、巨噬细胞而引起花生四烯酸和前列腺素等产物释放和氧自由基的产生，并刺激单核细胞释放TNFα等炎性因子，为了保证炎症因子不具有破坏性，很快出现抗炎反应。随着缺血再灌注损伤的加重，TNFα等促炎介质大量释放，促炎反应大于抗炎作用，产生SIRS。临床出现低血压、体温不正常等症状，最后可导致免疫失调，发生多脏器衰竭，这是复苏后死亡率居高不下的原因之一。TNFα是具有代表性的炎症介质，并能刺激其他几种促炎性细胞的生成，可引起典型的SIRS，并导致MODS。Yokoyama等发现心肌在低氧应激情况下，不仅能合成TNFαmRNA，而且还合成TNFα蛋白质。TNFα对成熟的心肌细胞及乳头肌细胞有浓度依赖性的负性肌力作用，证实了体内TNF的水平与心功能之间有直接关系。TNF的负性肌力作用来源于细胞因子诱导iNOS合成，产生过多的ＮＯ，从而引起骨骼肌病变和内皮细胞凋亡，加重了外周系统的病变。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的方法，用开心胶囊治疗，复制心肺复苏模型，在自主循环恢复180min后处死动物，摘取心脏；提取心肌组织总RNA，采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测目的基因的信使核糖核酸(mRNA) 表达强度。

【技术特征摘要】
1.一种对复苏犬心肌细胞免疫炎症因子的方法，用开心胶囊治疗，复制心肺复苏模型，在自主循环恢复180min后处死动物，摘取心脏；提取心肌组织总RNA，采用逆转录聚合酶链反应（RTPC...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秀娟，
申请(专利权)人：杨秀娟，
类型：发明
国别省市：甘肃;62