The invention discloses a method for enhancing a polymerase chain reaction, and the method comprises the following steps: adding PCR enhancer in the PCR amplification system, enhanced after PCR amplification system, the enhancement of PCR mixture of six alcohol and trehalose as agent; program parameters after setting the PCR amplification system enhanced, and amplification experiment, amplified products; the PCR products placed in fluorescent quantitative PCR amplification test. The present invention provides a method for enhancing the polymerase chain reaction, the mixture has six alcohol and trehalose as PCR enhancer nucleic acid amplification reaction efficiency and / or yield is increased, so as to improve the sensitivity of detection of nucleic acid amplification reaction using nucleic acid.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
,特别涉及一种聚合酶链式反应增强的方法。
技术介绍
聚合酶链式反应(polymerasechainreaction;PCR)是一种用于扩增放大特定的核酸片段(DNA/RNA)的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的核酸大幅增加。一般PCR主要为采用结合所选核酸模板(如DNA或RNA)的至少上游、下游两种寡核苷酸引物,在DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶、TthDNA聚合酶)的作用下对目的核酸模板片段进行扩增。可利用常规方法从限制性消化物中纯化得到上述两种寡核苷酸引物,或者可通过合成方法生产上述引物。引物优选为在扩增中效率最高的单链,但引物也可以是双链。双链引物首先被变性(如采用加热方法使其变性),即处理以分离各链。PCR实验采用的核酸模板不需要纯化,可通过如专利CN101665785B所述的技术从样本中提取核酸。核酸可获自各种来源,如质粒或天然来源,包括细菌、酵母、病毒、细胞器或高级生物。如果核酸模板是单链RNA,则需要在用作PCR模板之前使单链RNA逆转录为DNA,即RNA指导下的DNA合成。可通过任何合适的复制方法,包括化学或酶学方法完成RNA指导下的DNA合成,随后DNA经过加热变性(变性温度一般范围约为90-105℃,时间一般进行约30秒或更久)成为cDNA。如果核酸模板是双链,则需要在用作PCR模板之前使两条链分离开。可通过任何合适的变性方法,包括物理、化学或酶学方法使链分离。自PCR方法被建立以来,在30年的时间里,发展很快,已有一系列PCR方法被设计出来,并广泛应 ...
【技术保护点】
一种聚合酶链式反应增强的方法,其特征在于,所述方法包括:在PCR扩增体系中加入PCR增强剂,得到增强后的PCR扩增体系,所述PCR增强剂为己六醇和海藻糖的混合物;设置所述增强后的PCR扩增体系的程序参数,并进行扩增实验,得到扩增产物;将所述扩增产物放置在荧光定量PCR扩增仪上进行测试。
【技术特征摘要】
1.一种聚合酶链式反应增强的方法,其特征在于,所述方法包括:在PCR扩增体系中加入PCR增强剂,得到增强后的PCR扩增体系,所述PCR增强剂为己六醇和海藻糖的混合物;设置所述增强后的PCR扩增体系的程序参数,并进行扩增实验,得到扩增产物;将所述扩增产物放置在荧光定量PCR扩增仪上进行测试。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述PCR增强剂为山梨糖醇和海藻糖的混合物。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述PCR增强剂为甘露醇和海藻糖的混合物。4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述PCR增强剂为甘露醇,山梨糖醇和海藻糖的混合物。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增体系,包括:PCR缓冲溶液,dNTPs,H-Taq酶,上游引物,下游引物,标记物,和碱基模板,所述碱基模板为DNA模板或RNA模板,所述标记物为荧光探针或SYBRGreenⅠ染料。6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增体系还包括:Tth酶和醋酸锰。7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述设置增强后的PCR扩增体系的程序参数,并进行扩增实验,得到扩增产物的步骤包括:如果所述碱...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈晓亮,周雷,刘佳,邓中平,戴立忠,
申请(专利权)人:湖南圣湘生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:湖南;43
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