本发明专利技术提供多核苷酸、多肽、重组的改良型痘苗病毒安卡拉株(rMVA)和相关疫苗组合物以及用于预防和治疗流感病毒感染的方法。提供编码多拷贝M2流感病毒胞外域肽的分离多核酸或含所述多核苷酸的rMVA。还提供诱导对象针对流感病毒免疫响应的方法或治疗感染流感病毒引起或导致的疾病或症状的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】流感病毒基质2蛋白的胞外域、其表达系统和应用
技术介绍
流感病毒是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)家族的负义RNA成员，引起人和动物疾病。流感病毒感染常见且可为流行性或季节性。尽管流感病毒感染不常引起感染个体的死亡，但发病率严重。因此，流感病毒流行可导致重大经济损失。此外，流感病毒感染对某些个体群可能更危险，如心脏病患者、C.A.R.A.患者或年长者。流感病毒以复发方式引起疾病，这是由于许多复杂的因素，包括:1)水鸟和水禽中存在不同亚型流感A病毒的已建立储器；2)禽流感病毒与其他动物如猪的流感病毒重组的能力，该过程称为‘抗原转移’ ；3)由于缺乏病毒RNA聚合酶的校对活性而在病毒基因产物中积累的突变，该过程称为‘抗原漂移’(Tollis，M.和L.Di Trani, Vet.J.164:202-215(2002))。抗原转移、抗原漂移和禽流感病毒感染其他宿主如猪和人的能力产生导致人严重疾病的新病毒。这些重配和突变事件组合引起病毒两种表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)中良好表征的抗原可变性，其为所述病毒提供逃逸先前感染或接种疫苗诱导所产生的免疫响应(尤其是中和抗体)的机制。(Palese，P.和J.F.Young, Science 215:1468-1474; Gorman, 0.T.,等，Curr.Top.Microbiol.1mmunol176:75-97;和 Yewdel 1，J.W.，等，Nature 279:246-248)。为了预测可能对人类健康具有全球影响的特定流感亚型，必须依赖监督程序生产流感疫苗。生产亚型匹配疫苗(由灭活的或‘裂解的’病毒颗粒组成)的时间一般最少需要6-8个月。面对病毒亚型引起的严重流感病毒流行时，这种时间延迟可能导致全国或全球传播，发病率和死亡率极高。因此，非常需要对不同亚型流感病毒有效的流感疫苗。流感病毒包含单链RNA的8个区段-形成该病毒的遗传指令。其表面覆盖有一层两种不同糖蛋白:一种由血凝素(HA)分子构成，另一种由神经氨酸酶(NA)构成。病毒衣壳由病毒核糖核酸和若干所谓的“内部”蛋白(聚合酶(PB1、PB2和PA)、基质蛋白(Ml)和核蛋白(NP))构成。由于传统上已证实针对HA和NA的抗体在对抗感染方面最有效，很多研究都集中在这些分子的结构、功能和遗传变异方面。不同于HA和NA，跨膜病毒M2蛋白(M2e)的外部结构域高度保守且针对该表位的抗体在小鼠中具有保护性(Treanor, J.J.，等，J.Virol.64:1375-1377 (1990) ; Frace, A.M.,等，Vaccine 17:2237-2244(1999) ;ffanli, L.,等，Immunol.Lett.93:131-136 (2004);和Fan，J.，等，Vaccine 22:2293-3003(2004))。所述M2蛋白是A型流感病毒的整合膜蛋白，在病毒感染细胞的质膜上表达。由于病毒中该蛋白丰度低，所以针对该表位的抗体应答的保护机制不是通过病毒中和介导，而是通过抗体依赖性、细胞介导的细胞毒性。(Jegerlehner, A.,等，J.1mmunol.172:5598-5605 (2004))。开发诱导免疫响应疫苗的主要障碍是选择合适的递送形式。单独使用或一起使用的DNA质粒疫苗和病毒载体， 以及重组蛋白或肽是合理的疫苗递送形式，但是，各种形式有其优点和缺点。例如，DNA疫苗容易生产且给予安全，但效力不足，尤其是临床试验中，需要给予大(毫克)剂量。Liu, M.A.J.1ntern.Med.253:402-410 (2003)。使用病毒载体递送疫苗已引发关注，通常涉及安全性和对载体的预存免疫性。因此，非常需要开发安全有效的新流感疫苗。
技术实现思路
本专利技术提供一种含编码多肽的编码区域的分离多核苷酸，其中所述多肽包含至少5种流感病毒基质2蛋白(M2)胞外域肽。在一个实施方式中，所述多肽包括相对彼此以任何顺序排列的下述氨基酸序列的任何5种或更多:⑴SEQ ID NO:1 (M2e#l_C) ; (ii).SEQ ID N0:2(M2e#2_C);(iii)SEQ ID NO:3(M2e#3_C);(iv)SEQID NO:4(M2e#4_C);(v)SEQID N0:5(M2e#5_C);(vi)SEQ ID NO:6(M2e#6_C);(vii) SEQ ID NO:7(M2e#l_S);(viii)SEQID N0:8(M2e#2_S) ; (ix)SEQ ID NO: 9 (M2e#3_S) ; (x) SEQ ID NO: 10 (M2e#4_S) ; (xi)SEQ IDN0:ll(M2e#5_S);和(xii)SEQ ID NO:12(M2e#6_S)。还提供含编码多肽的编码区域的分离多核苷酸，其中所述多肽包含相对彼此以任何顺序排列的下述M2胞外域肽的任何3种或更多:(i)SEQ ID N0:l(M2e#l_C) ; (ii)SEQ ID N0:2(M2e#2_C);(iii)SEQ ID NO:3(M2e#3_C);(iv)SEQ ID NO:4(M2e#4_C);(v)SEQID N0:5(M2e#5_C);(vi)SEQ ID NO:6(M2e#6_C);(vii)SEQID NO:7(M2e#l_S);(viii)SEQID N0:8(M2e#2_S) ; (ix)SEQ ID NO: 9 (M2e#3_S) ; (x) SEQ ID NO: 10 (M2e#4_S) ; (xi)SEQ IDN0:ll(M2e#5_S);和(xii) SEQ ID NO: 12 (M2e#6_S).在一个实施方式中，所述多核苷酸包含编码多肽的编码区域，所述多肽含相对彼此以任何顺序排列的下述6种M2胞外域肽:(i)SEQ ID N0:l(M2e#l_C);(ii)SEQ ID NO:2(M2e#2_C);(iii)SEQ ID NO:3(M2e#3_C);(iv)SEQID N0:4(M2e#4_C);(v)SEQ ID NO:5(M2e#5_C);和(vi)SEQ ID NO:6(M2e#6_C)或(i)SEQ ID N0:7(M2e#l-S);(ii)SEQ ID NO:8 (M2e#2_S);(iii)SEQID NO:9(M2e#3_S);(iv)SEQID N0:10(M2e#4_S) ; (v) SEQ ID NO: 11 (M2e#5_S);和(vi)SEQ ID NO: 12 (M2e#6_S)的氨基酸序列。在某些实施方式中，本专利技术多核苷酸编码多肽，所述多肽含相对彼此以任何顺序排列的6种M2胞外域肽，在至少两种M2胞外域肽之间插有至少一种接头肽，且任选地在至少两种M2胞外域肽之间插有表位。所述表位可为T细胞表位或B细胞表位。 在一些实施方式中，本专利技术针对含编码多肽的多核苷酸的载体,所述多肽含多拷贝的M2胞外域肽。所述载体可为病毒载体，如痘苗病毒载体，如改良的痘苗病毒安卡拉株(MVA)。本专利技术载体还可表达其他多肽，如流感病毒蛋白或其片段。所述其他多肽可选自下组:血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质I蛋白(Ml)、基本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·吉南，M·莱西，M·斯基多普鲁斯，N·迈托，
申请(专利权)人：新兴产品开发盖瑟斯堡有限公司，
类型：
国别省市：
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