本发明专利技术公开了一种抑制A型流感病毒M1蛋白发生磷酸化的方法及其应用。本发明专利技术提供的抑制A型流感病毒的M1蛋白发生磷酸化的方法，是将A型流感病毒的M1蛋白自N末端第132位氨基酸残基由酪氨酸突变为其它氨基酸。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的M1蛋白具体如序列表的序列1所示。本发明专利技术对于流感病毒侵染的机理分析，流感病毒的防治等具有重大价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抑制A型流感病毒Ml蛋白发生磷酸化的方法及其应用，还涉及A型流感病毒的Ml蛋白的磷酸化位点和相关结构域。
技术介绍
流行性感 冒病毒(influenza virus),是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)流行性感冒病毒(Influenza virus)属的代表种，简称流感病毒，包括人流感病毒和动物流感病毒。人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原体。甲型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行，例如1918 1919年的大流行中，全世界至少有2000万 4000万人死于流感。乙型流感病毒对人类致病性较低。丙型流感病毒只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行。甲型流感病毒于1933年分离成功，乙型流感病毒于1940年获得，丙型流感病毒直到1949年才成功分离。甲型流感病毒的RNA由8个节段组成，第1、2、3个节段编码的是RNA多聚集酶，第4个节段负责编码血凝素；第5个节段负责编码核蛋白，第6个节段编码的是神经氨酸酶；第7个节段编码基质蛋白(Ml蛋白)，第8个节段编码的是一种未知功能的能起到拼接RNA功能的非结构蛋白。基质蛋白构成了病毒的外壳骨架。基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。当流感病毒在宿主细胞内完成其繁殖之后，基质蛋白是分布在宿主细胞细胞膜内壁上的，成型的病毒核心衣壳能够识别宿主细胞膜上含有基质蛋白的部位，与之结合形成病毒结构，并以出芽的形式突出释放成熟病毒。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抑制A型流感病毒Ml蛋白发生磷酸化的方法及其应用。本专利技术提供的抑制A型流感病毒的Ml蛋白发生磷酸化的方法，是将A型流感病毒的Ml蛋白自N末端第132位氨基酸残基由酪氨酸突变为其它氨基酸。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。本专利技术还提供了一种抑制A型流感病毒的Ml蛋白发生磷酸化的方法，是将A型流感病毒中编码Ml蛋白自N末端第132位酪氨酸的密码子突变为编码其它氨基酸的密码子，从而抑制A型流感病毒的Ml蛋白发生磷酸化。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。所述酪氨酸的密码子具体可为“TAC”，所述丙氨酸的密码子具体可为“GCC”，所述苯丙氨酸的密码子具体可为“TTC”，所述天冬氨酸的密码子具体可为“GAC”。本专利技术还提供了一种降低A型流感病毒的Ml蛋白磷酸化水平的方法，是将A型流感病毒的基因组中编码Ml蛋白自N末端第132位酪氨酸的密码子突变为编码其它氨基酸的密码子，从而降低A型流感病毒的Ml蛋白磷酸化水平。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。所述酪氨酸的密码子具体可为“TAC”，所述丙氨酸的密码子具体可为“GCC”，所述苯丙氨酸的密码子具体可为“TTC”，所述天冬氨酸的密码子具体可为“GAC”。本专利技术还提供了一种抑制A型流感病毒的Ml蛋白自N末端第132位氨基酸残基发生磷酸化的方法，是将第132位氨基酸残基的密码子突变为编码其它氨基酸的密码子，从而抑制A型流感病毒的Ml蛋白第132位氨基酸残基发生磷酸化。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。所述酪氨酸的密码子具体可为“TAC”，所述丙氨酸的密码子具体可为“GCC”，所述苯丙氨酸的密码子具体可为“TTC”，所述天冬氨酸的密码子具体可为“GAC”。本专利技术还保护一种蛋白质，是将A型流感病毒的Ml蛋白自N末端的第132位氨基酸残基由酪氨酸突变为其它氨基酸得到的蛋白质。所述其它氨基酸为丙 氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。本专利技术还保护一种DNA分子(特异DNA分子)，是将A型流感病毒的Ml蛋白的编码基因自5’末端第394至396位氨基酸残基的密码子由酪氨酸的密码子突变为编码其它氨基酸的密码子得到的DNA分子。所述其它氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸。所述A型流感病毒的Ml蛋白具体如序列表的序列I所示。所述A型流感病毒的Ml蛋白的编码基因为如下I)至4)中任一所述的DNA分子1)序列表中序列2自5’端第I至第759位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在严格条件下与I)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；4)与I)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码所述蛋白的DNA分子。所述严格条件为在O. IXSSPE (或O. I X SSC)、0. I %SDS的溶液中，65°C条件下杂交并洗膜。所述酪氨酸的密码子具体可为“TAC”，所述丙氨酸的密码子具体可为“GCC”，所述苯丙氨酸的密码子具体可为“TTC”，所述天冬氨酸的密码子具体可为“GAC”。本专利技术还保护一种重组病毒，是将质粒pHH21-PA、质粒ρΗΗ21_ΡΒ1、质粒 pHH21-PB2、质粒 pHH21-HA、质粒 pHH21_NP、质粒 pHH21_NA、质粒 pHH21_NS、质粒pcDNA3. 0-ΡΑ、质粒 pcDNA3. 0-PB1、质粒 pcDNA3. 0-PB2、质粒 pcDNA3. O-NP 和特异重组质粒共转染离体哺乳动物细胞后培养哺乳动物细胞得到的重组病毒(细胞培养上清液即为重组病毒液);所述质粒pHH21-PA为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列3所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒PHH21-PB1为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列4所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒pHH21-PB2为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列5所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒PHH21-HA为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列6所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒PHH21-NP为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列7所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒PHH21-NA为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列8所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒PHH21-NS为在载体pHH21的多克隆位点(如BsmBI酶切位点)插入序列表的序列9所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒pcDNA3. O-PA为在载体pcDNA3. O的多克隆位点(如KpnI和XhoI酶切位点之间)插入序列表的序列3所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒pcDNA3. O-PBl为在载体pcDNA3. O的多克隆位点(如KpnI和XhoI酶切位点之间)插入序列表的序列4所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒pcDNA3. 0-PB2为在载体pcDNA3. O的多克隆位点(如KpnI和XhoI酶切位点之间)插入序列表的序列5所示的双链DNA分子得到的质粒；所述质粒pcDNA3. O-NP为在载体PCDNA3. O的多克隆位点(如KpnI和XhoI酶切位点本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抑制A型流感病毒的M1蛋白发生磷酸化的方法，是将A型流感病毒的M1蛋白自N末端第132位氨基酸残基由酪氨酸突变为其它氨基酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘文军，王珊珊，赵振东，刘晓玲，李晶，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。