【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程。
技术介绍
1、库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzevii)是一种新兴的非酿酒酵母属酵母，该酵母广泛分布于自然环境中，尤其在传统发酵食品和饮料的自发发酵过程中，常作为关键微生物发挥重要作用。其在利用有机酸、释放水解酶、生成风味化合物以及展现益生菌特性等方面的独特功能，使其成为食品和饲料工业中极具潜力的发酵剂。
2、与酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)相比，库德里阿兹威毕赤酵母表现出更强的环境耐受性，能够在高温、低ph、高渗透压等极端条件下生长，这使其在苛刻的工业发酵过程中具有更强的适应性。
3、然目前，常用的库德里阿兹威毕赤酵母检测技术主要依赖于传统的微生物分离培养方法和高通量测序技术。其中，前者依赖培养基设计、操作繁琐、耗时长、人力物力成本高；而后者测序成本高、数据分析复杂、时效性差、易受测序深度和偏好性影响，定量精度有限。因此，开发一种快速、简便、准确且低成本的库德里阿兹威毕赤酵母定量方法对于优化发酵工艺、提高产品质量及保障食品安全具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种引物pk-f2和pk-r，所述引物pk-f2的序列为：5'-tggagttttgtgacgagcct-3'；所述引物pk-r的序列为：5'-caggttccgcagcagctata-3'。
2、本专利技术还提供了一种定性检测库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzev
3、本专利技术另外还提供了一种检测库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzevii)的试剂盒，含有所述的引物pk-f2和pk-r。
4、本专利技术另外同时提供过了一种定量检测库德里阿兹威毕赤酵母(pichiakudriavzevii)的方法，包括：依据月桂酸钠—20t酶法提取样品中的基因组dna，以所得基因组dna为模板，用权利要求1所述引物pk-f2和pk-r进行qpcr，获得的cq值；将cq值代入标准曲线，计算得细胞含量。
5、进一步地，所述qpcr的反应体系为：
6、。
7、进一步地，所述qpcr的反应条件为：
8、。
9、进一步地，所述标准曲线的绘制方法：计算库德里阿兹威毕赤酵母菌悬液中细胞数量；依据月桂酸钠—20t酶法提取菌悬液中库德里阿兹威毕赤酵母的基因组dna，对基因组dna梯度稀释；测量不同梯度稀释液的细胞数量对应的cq值，绘制标准曲线。
10、本专利技术提供的引物pk-f2和pk-r可以通过qpcr技术实现对大曲、酒醅等样本中库德里阿兹威毕赤酵母的快速定量检测；准确性高、有效性好、灵敏性高。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.引物PK-F2和PK-R，其特征是，
2.定性检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的方法，其特征是，包括：将权利要求1所述引物PK-F2和PK-R对检测菌液进行菌落PCR后，电泳图谱上PCR产物在100～250bp内有条带，则菌液为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。
3.检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的试剂盒，其特征是，含有权利要求1所述的引物PK-F2和PK-R。
4.定量检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的方法，其特征是，包括：
5.依据权利要求4所述定量检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的方法，其特征是，所述qPCR的反应体系为：
6. 依据权利要求4所述定量检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的方法，其特征是，所述qPCR的反应条件为：
7. 依据权利要求4所述定量检测库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kud
...【技术特征摘要】
1.引物pk-f2和pk-r，其特征是，
2.定性检测库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzevii)的方法，其特征是，包括：将权利要求1所述引物pk-f2和pk-r对检测菌液进行菌落pcr后，电泳图谱上pcr产物在100～250bp内有条带，则菌液为库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzevii)。
3.检测库德里阿兹威毕赤酵母(pichia kudriavzevii)的试剂盒，其特征是，含有权利要求1所述的引物pk-f2和pk-r。
4.定量检测库德里阿兹...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩培杰，韦宇华，朱海燕，张日鹏，郭良臣，文章，姚尚杰，黄魏，白逢彦，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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