糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。本发明专利技术所提供的糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒及其制备方法和用途。
技术介绍
糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)是一种心肌细胞中含量较高的酶。糖原磷酸化酶为糖原分解的关键酶，在心肌细胞肌浆网构成糖原分解复合物，该复合物对缺血引起的糖原分解特别敏感，使其构成发生改变，形成町溶性糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)，透过细胞膜进入血液。糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)对心肌缺血缺氧敏感，在心肌损伤早期(小于4h)即可释放入血，是急性心肌损伤早期诊断的一项很好的指标。对急性心肌缺血的早期诊断优于心电图，是目前发现的急性心肌梗死(AMI)病人胸痛发作后4h内最敏感的指标。GPBB的这一特点在AMI的早期诊断方面弥补了cTnI的不足。随着生物化学、免疫、分子生物学及其检测技术的发展，发现GPBB对缺血性心肌损伤的早期诊断、产科、儿科学等方面的研究颇具价值。常用的酶联免疫吸附试验(ELIsA)等检测方法耗时、需要特殊设备，不适于急诊室和现场对AMI的快速诊查的需要。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。优选的，所述底板为PVC底板。优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。优选的，所述检测线上包被有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2。优选的，所述质控线上包被有羊抗鼠免疫球蛋白IgG。所述抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1和抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2可以是相同的单克隆抗体，也可以是不同的单克隆抗体。优选的，所述抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2为Anti-GPBB抗体[17B6]，或所述抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1为Anti-GPBB抗体[17B6]，所述抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2为Anti-GPBB抗体[1G6]。优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50-100mM。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0.1-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0.1-20mg/ml。更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0.25-0.5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为4-8mg/ml。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。优选的，所述检测试剂盒用于检测样品中的糖原磷酸化酶同工酶BB，所述样品选自人全血、血清或血浆中的一种或多种的组合。本专利技术第二方面提供所述糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用胶体金标记的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1溶液喷涂金标垫，制得包含抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1的金标垫；2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2及羊抗鼠免疫球蛋白IgG，制得包被后的硝酸纤维素膜；3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。优选的，本专利技术所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10-40mM。更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0.1-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0.1-20mg/ml。更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0.25-0.5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为4-8mg/ml。所述预处理缓冲液的溶剂为水。所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。本专利技术第三方面提供所述糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒在糖原磷酸化酶同工酶BB检测领域的用途。本专利技术的有益效果为：本专利技术所提供的糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒兼具高灵敏性和高特异性，能够快速检测糖原磷酸化酶同工酶BB。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围；在本专利技术说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
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【技术保护点】
一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体‑1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。

【技术特征摘要】
1.一种糖原磷酸化酶同工酶BB胶体金法检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-1，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。2.如权利要求1所述的胶体金法检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。3.如权利要求1所述的胶体金法检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上包被有抗糖原磷酸化酶同工酶BB单克隆抗体-2。4.如权利要求1所述的胶体金法检测试剂盒，其特征在于，质控线上包被有羊抗鼠免疫球蛋白IgG。5.如权利要求1所述的胶体金法检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为50～100mM。6.如权利要求1所述的胶体金法检测试剂盒，其特征在于，所述金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为10～40mM。7.根据权利要求6所述的胶体法金检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液中还包括NaCl和冠醚，所述冠醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延龙，李林，
申请(专利权)人：上海凯创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31