一种检测血磷的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物化学领域，公开了一种检测血磷的方法和试剂盒。该方法将标准溶液和待测血样分别与由钼酸铵、吐温-20和孔雀绿组成的混合液在强酸下反应，然后再分别将各自反应得到的绿色复合物在630nm波长下检测吸光度，最后通过比色法得到待测血样的血磷浓度，所述标准溶液由磷酸二氢钾、吐温-20和牛血白蛋白组成。本发明专利技术试剂盒包括由1.6mmol/L的磷酸二氢钾、0.5-1.0mol/L吐温-20和0.5-1.0g/L的牛血白蛋白组成的标准溶液。本发明专利技术所述方法能够避免标准溶液和待测血样用孔雀绿法检测时所得离子缔合物显色不一致的问题，同时增强显色的稳定性，提高了检测血磷的准确性，能广泛应用于血磷的检测中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化学领域，具体涉及一种检测血磷的方法和试剂盒。
技术介绍
磷是人体遗传物质核酸以及人体能量转换的关键物质三磷酸腺苷(ATP)的重要组分，也是多种酶和生物膜磷脂的组分，还是构成骨骼、牙齿的重要成分，对人体生命活动有十分重要的作用。血液中的磷主要有两种存在形式，即有机磷和无机磷。其中，血液无机磷称为血磷，以无机磷酸盐的形式存在，如Na2HP04、NaH2P04、CaHPO4、MgHPO4等。血磷的高低对人体生命活动有直接的影响。血磷含量异常通常都是继发性的，如血磷降低常见于维生素D缺乏、 高胰岛素血症、长期腹泻、吸收不良、甲旁亢、肾功能衰竭和输注大量葡萄糖液后等，血磷升高常见于维生素D中毒、甲状旁腺机能减退和肾滤过磷障碍等。无论血磷浓度升高或是降低，对人体生命活动都有极大的影响，严重时可加重病情，同时引发其他疾病。因此，检测血液中无机磷浓度对于疾病的防治具有重要意义。目前，现有技术中检测血磷的方法以酶法较为精确，酶法利用的原理是，在340nm 波长下每分钟NADH的吸光度下降的速度与血磷浓度成正比，由此测算出血磷的浓度大小。 但是，酶法中的试剂要在340nm波长下测定，但是绝大多数可见光分析仪不具备340nm波长，这极大地限制了酶法的应用范围，况且酶法的试剂价格昂贵，同样不利于其推广应用。鉴于上述原因，现有方法中有利用孔雀绿法使血磷直接与酸性孔雀绿钼酸显色剂作用，生成绿色复合物，然后在630nm波长下进行吸光度检测，从而检测出血磷的浓度。但是，在该方法中标准溶液通常单纯采用磷酸盐溶液，而待测血液样品中，除了含有磷酸盐溶液外，还含有蛋白等物质，是一个复杂的体系，这使得标准溶液和待测样品用孔雀绿法形成的复合物的颜色不属于同一个色系，导致通过比色法计算出的血磷浓度出现较大误差，影响检测的准确度。此外，单纯采用磷酸盐溶液作为标准溶液，用孔雀绿法反应生成的绿色复合物的颜色会随时间延长而逐渐变浅，显色的稳定性较差，这也造成现有孔雀绿法准确性不高的原因之一。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测血磷的方法和试剂盒，使得该试剂盒和方法能够提高检测无机磷的准确度。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案一种检测血磷的方法，将标准溶液和待测血样分别与由钼酸铵、吐温-20和孔雀绿组成的混合液在强酸下反应，然后再分别将各自反应得到的绿色复合物在630nm波长下检测吸光度，最后通过比色法得到待测血样的血磷浓度，所述标准溶液由磷酸二氢钾、吐温-20和牛血白蛋白组成。其中，样品血磷浓度(mmol/L)=标准溶液浓度XA#/Afe，所述待测血样与混合液的体积比为1 100，所述标准溶液与混合液的体积比为1 100，所述标准溶液中磷酸二氢钾的浓度为1. 6mmol/L，所述标准溶液中吐温-20的浓度为0. 5-1. Omol/L，优选为 0. 75mol/L，所述标准溶液中牛血白蛋白的浓度为0. 5-1. Og/L。其中，所述混合液中钼酸铵的浓度为0. 3-0. 6mol/L，优选为0. 5mol/L，所述混合液中孔雀绿的浓度为0. 5-0. 8mol/L，优选为0. 7mol/L，所述混合液中吐温-20的浓度为 0. 5-1. Omol/L，优选为0. 75mol/L，强酸优选为l-2mol/L的盐酸。在强酸中，血磷与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，而磷钼酸铵与孔雀绿很快生成绿色离子缔合物孔雀绿-磷钼酸铵，利用此原理可将标准溶液和待测血样通过比色法检测样品中血磷的浓度。但是，现有标准溶液与待测血样组成体系不同，在检测时会出现基质效应， 使得两者反应所得的离子缔合物分属不同色系，这样再通过比色法检测就会出现很大误差，因此，本专利技术在标准溶液中加入牛血白蛋白和吐温-20，模拟待测血样的体系环境，使标准溶液与待测血样形成的离子缔合物的颜色在同一个色系中，避免误差的产生。在不同的非离子表面活性剂体系中，离子缔合物的最大吸收峰不同，本专利技术使用的吐温-20为非离子表面活性剂，最大吸收峰为620-650nm，具有乳化、扩散、增溶、稳定显色作用，三苯甲烷类染料-孔雀绿在水溶液中生成质子化孔雀绿阳离子MGH2+，具有D3螺旋桨三维结构，当离子缔合物形成后，若不加吐温-20，随放置时间的延长，水中离子缔合物三维结构中苯环的弛豫会导致其颜色逐渐退去，若有吐温-20，处于高黏度溶剂中苯环的弛豫过程会受阻，溶液显色稳定性增强。此外，吐温-20还增加了孔雀绿-磷钼酸铵离子缔合物的溶解度，增加反应液的吸光度。本专利技术还提供一种检测血磷的试剂盒，包括由1. 6mmol/L的磷酸二氢钾、0. 5-1. 0mol/L吐温-20和0. 5-1. 0g/L的牛血白蛋白组成的标准溶液。其中，所述标准溶液中吐温-20的浓度优选为0. 75mol/L。本专利技术所述试剂盒还包括由l-2mol/L 的盐酸、0. 3-0. 6mol/L 的钼酸铵、0. 5-1. 0mol/L 吐温-20 和 0. 5-0. 8mol/L的孔雀绿组成的反应试剂。其中，所述反应试剂中钼酸铵的浓度优选为0. 5mol/L,吐温-20的浓度优选为 0. 75mol/L，孔雀绿浓度优选为0. 7mol/L。本专利技术试剂盒可以配制成单试剂，即由l-2mol/L的盐酸、0. 3-0. 6mol/L的钼酸铵、0. 5-1. 0mol/L吐温-20和0. 5-0. 8mol/L的孔雀绿组成的反应试剂；由1. 6mmol/L的磷酸二氢钾、0. 5-1. 0mol/L吐温-20和0. 5-1. 0g/L的牛血白蛋白组成的标准溶液。本专利技术所述方法检测血磷浓度具有较高准确度和精密度，试验结果显示，本专利技术所述方法检测的结果在质控品的士2SD范围内。此外，本专利技术对同一样品进行重复性检测， 各结果之间的标准差率(变异系数)为1.30%，小于标准的3%。上述试验结果表明本专利技术具有很高的准确度和精密度。由以上技术方案可知，本专利技术所述方法能够消除因标准溶液体系环境与待测血样体系环境不同而出现的基质效应，避免两者用孔雀绿法检测时所得离子缔合物分属不同色系，同时增强显色的稳定性，提高了检测血磷的准确性，可以广泛应用于血磷的检测中。具体实施例方式本专利技术公开了一种检测血磷的方法和试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术所述方法及试剂盒已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。以下就本专利技术所提供的一种检测血磷的试剂盒和方法做进一步说明。实施例1 本专利技术所述方法将由1. 6mmol/L的磷酸二氢钾、0. 75mol/L的吐温-20和1. Og/L的牛血白蛋白组成的标准溶液与由0. 5mol/L的钼酸铵、0. 75mol/L的吐温-20和0. 7mol/L的孔雀绿组成的混合液在盐酸(1.5mol/L)中反应，将得到绿色复合物在630nm波长下检测吸光度Afe，待测血样与混合液反应后也在630nm波长下检测吸光度A# (待测血样和标准溶液与混合液的体积比均为1 100)，与所述绿色复合物在630本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种检测血磷的方法，其特征在于，将标准溶液和待测血样分别与由钼酸铵、吐温－２０和孔雀绿组成的混合液在强酸下反应，然后再分别将各自反应得到的绿色复合物在６３０ｎｍ波长下检测吸光度，最后通过比色法得到待测血样的血磷浓度，所述标准溶液由磷酸二氢钾、吐温－２０和牛血白蛋白组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：董理，
申请(专利权)人：董理，
类型：发明
国别省市：82