本发明专利技术涉及一种食管癌相关基因-4的用途，属于生物基因工程技术领域。提供一种食管癌相关基因-4（ECRG4）的新的用途，所述食管癌相关基因-4用于预防或治疗肝炎，尤其用于预防或治疗丙肝。与现有将ECRG4用于抑癌的用途不同，所述ECRG4基因转入肝炎病毒（尤其是HCV）感染细胞后，能够逆转肝炎病毒（尤其是HCV）的免疫逃避，促进免疫细胞对肝炎病毒感染细胞（尤其是HCV感染细胞）的识别和杀伤作用实现抗感染（尤其是HCV感染）的目的，实现预防或治疗肝炎的效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种食管癌相关基因，更具体的说涉及一种食管癌相关基因-4的用途，属于生物基因工程
技术介绍
食管癌相关基因-4 (ECRG4)最初是Bi等人识别并克隆，他们发现与正常成人食管上皮相比，食管鳞状细胞癌组织和细胞系中ECRG4的表达明显降低。因此，认为ECRG4可能是一种新的候选肿瘤抑制基因。近年来对于食管癌相关基因_4 (ECRG4)在食道癌、结肠癌、胶质瘤和前列腺癌中的研究也较多。如李林蔚等在中国医学科学院北京协和医学博士研究生学位论文中披露的一种食管癌相关基因4在食管鳞状细胞癌中的功能研究中提及的ECRG4是食管鳞状细胞癌(ESCC)的候选抑癌基因，认为启动子高甲基化可能是ECRG4在ESCC转录失活的主要机制，认为ECRG4可能是通过参与NF- κ B通路调控C0X-2的表达来发挥其抑癌功能，可以作为ESCC的潜在治疗药物。但是，现有技术中关于ECRG4的报道均是针对ECRG4在抑癌作用方面的研究，并没有报道ECRG4在预防或治疗肝炎(如丙肝)中应用的相关文献。
技术实现思路
本专利技术针对以上现有技术中存在的问题，提供一种食管癌相关基因-4 (ECRG4)的新的用途，能够实现预防或治疗肝炎的技术效果。本专利技术的目的是通过以下技术方案得以实现的，一种食管癌相关基因_4的用途，所述的食管癌相关基因_4用于预防或治疗肝炎。本专利技术通过研究发现食管癌相关基因-4 (ECRG4)在肝炎病毒感染的患者外周血单个核细胞中低表达，进一步研究发现ECRG4基因启动子区甲基化是ECRG4在肝炎病毒感染细胞内低表达的原因。因此，本专利技术通过研究ECRG4对肝炎的预防或治疗作用，发现将ECRG4基因转入肝炎感染细胞，能够逆转肝炎病毒的免疫逃避，促进免疫细胞对肝炎病毒感染细胞的识别和杀伤作用，从而达到抗感染的目的，实现预防或治疗的作用。在上述的食管癌相关基因-4的用途中，作为优选，所述的食管癌相关基因_4(ECRG4)用于预防或治疗丙肝。在上述的食管癌相关基因_4的用途中，作为优选，所述食管癌相关基因_4通过克隆入真核表达质粒PCDNA3.1得到重组质粒pcDNA3.1-ECRG4后用于预防或治疗丙肝。重组质粒pcDNA3.1-ECRG4能够作为一个分子药，同样能够促使ECRG4过表达，促进免疫细胞对丙肝病毒(HCV)感染细胞的识别和杀伤作用，实现预防或治疗丙肝的效果。在上述的食管癌相关基因_4的用途中，作为优选，所述的食管癌相关基因_4(ECRG4)用于使免疫细胞识别和杀伤丙肝病毒感染细胞。综上所述，本专利技术与现有技术相比，具有以下优点:本专利技术的食管癌相关基因-4 (ECRG4)的新用途，与现有的将ECRG4用于抑癌的用途不同，本专利技术的ECRG4基因转入肝炎病毒(尤其是HCV)感染细胞后，能够逆转肝炎病毒(尤其是HCV)的免疫逃避，促进免疫细胞对肝炎病毒感染细胞(尤其是HCV感染细胞)的识别和杀伤作用，从而达到抗感染(尤其是HCV感染)的目的，实现预防或治疗肝炎的效果，优选情况下，本专利技术所述的ECRG4诱发免疫细胞识别和杀伤丙肝病毒(HCV)感染细胞，实现预防或治疗丙肝的效果。附图说明图1是本专利技术实施例中的丙肝患者和正常人的外周血单个核细胞内的ECRG4表达的检测结果图。图2是现有的pcDNA3.1的结构示意图。图3是本专利技术的重组质粒pcDNA3.1-ECRG4的结构示意图。图4是本专利技术对照组的CTL杀伤实验检测结果图。图5是本专利技术实验组的CTL杀伤实验检测结果图。具体实施例方式下面通过具体实施方式和附图，对本专利技术的技术方案作进一步具体的说明，但是本专利技术并不限于这些实施例。本专利技术的食管癌相关基因-4的用途，所述的食管癌相关基因_4 (ECRG4)用于预防或治疗肝炎。作为优选，所述的食管癌相关基因_4 (ECRG4)用于预防或治疗丙肝；更进一步的优选，通过将食管癌相关基因_4克隆入真核表达质粒pcDNA3.1得到重组质粒pcDNA3.1-ECRG4后再用 于预防或治疗丙肝。更具体的说，通过将本专利技术的ECRG4基因转入HCV感染细胞，逆转HCV感染细胞的免疫逃避，实现促进免疫细胞对HCV感染细胞的识别和细胞杀伤，从而达到抗HCV感染的目的，实现预防或治疗丙肝的效果。以下更进一步说明ECRG4基因能够实现预防或治疗丙肝的作用。一.丙肝患者外周血单个核细胞内ECRG4检测取20份丙肝病毒(HCV)阳性患者肝素抗凝的外周血(以健康体检的正常人外周血做对照)，将HCV患者肝素抗凝的外周血(以体检健康的正常人外周血做对照)和淋巴细胞分离液加入离心管中，采用常规的方法进行密度梯度离心分离外周血淋巴细胞，以 RIPA 缓冲液(25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 2mM EDTA, l%Triton-X-100, 1% 脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate) , 0.1%SDS, pH7.4)裂解细胞，加入IX蛋白酶抑制剂(购买自Pierce公司，美国)，在3500r/min且控制温度在4°C的条件下进行离心IOmin,取上清。然后利用Bio-Rad分析试剂盒(购买自Bio-Rad公司，美国)来检测蛋白浓度。以ant1-ECRG4(l:400,购买自 Sigma 公司，美国)和 β-actin (1:10000，购买自 Sigma 公司，美国)为一抗，40 μ g的上样量来进行Western blot检测，检测其中ECRG4蛋白表达情况，具体分析结果如图1所示。二.HCV感染的胎肝细胞制备1.培养人胎肝细胞取冻存的人胎肝细胞，经37°C复苏后，加入含有10%胎牛血清的DMEM (购买自Gibco公司)5mL，在1000转/分钟的条件下离心5分钟，去除冻存液，加入含有10%胎牛血清的DMEM，在37°C，5%C02的条件下进行培养，得到人胎肝细胞。2.HCV感染胎肝细胞取上述培养的人胎肝细胞以I X IO5细胞/孔的浓度种入6孔培养板，以含有10%胎牛血清的DMEM为培养液，进行培养过夜,然后,加入丙肝病毒(HCV)阳性患者血清0.5ml,以正常人血清做对照，进行体外感染人胎肝细胞，并以含有10%胎牛血清DMEM补足培养液，感染4h后，弃去培养上清，采用PBS缓冲液清洗4次后，加入含有10%胎牛血清的DMEM再进行培养，分别于培养24h、48h和72h时取培养细胞采用常规的免疫组化及RT-PCR加以鉴定即可，得到感染有HCV的人胎肝细胞。三.ECRG4过表达人胎肝细胞制备1.ECRG4表达质粒构建根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)的参考序列NM_032411.2(C2orf40):以上游引物5’ -GCGGATCCCTGCCTCCCCCGCGCG-3’，和下游引物 5’ -CTAGCGGCCGCACAGCGTGTGGCAAGTCATGGT-3’为引物对，通过PCR扩增从人乳腺组织中扩增ECRG4基因片段，基因长度517bp，上述PCR扩增的条件为94°C变性5min后，进入循环程序，所述的循环程序为:94°C变性30秒，60°C退火30，72°C延伸I分钟，共循环25次，然后再在72°C延伸lOmin，得到PCR扩增产物，将PCR产物经DNA纯化试剂盒纯化后，再经BamHI和Notl本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食管癌相关基因?4的用途，其特征在于，所述的食管癌相关基因?4用于预防或治疗肝炎。
【技术特征摘要】
1.一种食管癌相关基因-4的用途，其特征在于，所述的食管癌相关基因-4用于预防或治疗肝炎。2.根据权利要求1所述的食管癌相关基因_4的用途，其特征在于，所述的食管癌相关基因-4用于预防或治疗丙肝。3.根据权利要求2所述的食管癌相关基因_4用途，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈佳玉，刘池波，王海宝，金晓燕，
申请(专利权)人：陈佳玉，刘池波，王海宝，
类型：发明
国别省市：
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