一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒，所述试剂盒中包括核酸释放剂和PCR反应液，所述核酸释放剂包含莎梵婷（surfactin）0.01～0.5mM/L，氯化钾20～300mM/L，十二烷基磺酸钠0.01～2%和乙醇0.05～1%；所述PCR反应液中包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针。使用本发明专利技术试剂盒中的核酸释放剂释放核酸的方法与煮沸法的检测结果没有明显差异，而本发明专利技术中提取核酸时采用强烈的蛋白变性剂，快速破坏病原体外壳蛋白结构，释放出病原体核酸，无需加热即可完成DNA的释放和提取；本发明专利技术试剂盒检测TB的灵敏度可达400copies/ml，定量线性范围为400～4.00E+09copies/ml；应用该试剂盒可以对痰液等未知样本中的TB-DNA进行快速准确的检测，为诊断TB感染提供可靠的实验依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种结核分枝杆菌(TB)检测试剂盒，具体是一种基于荧光PCR的TB-DNA检测试剂盒。
技术介绍
结核分枝杆菌是结核病的病原菌，本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见；目前全球每年约出现8百万结核新病例，并导致约3百万人死亡；我国每年死于结核病的人约25万之多，是各类传染病死亡人数总和的两倍多；因此，结核病又成为了威胁人类健康的全球性卫生问题，并成为某些发展中国家和地区，特别是艾滋病高发区人群的首要死因。目前我国对结核病的临床诊断主要通过痰涂片镜检和细菌分离培养。痰涂片镜检法简单、快速，但灵敏度和特异度都达不到要求，而且受实验室条件、实验人员镜检技术水平的影响较大；此外，涂片法的检测精度大约为50%且无法检出耐药菌株。细菌分离培养是结核病诊断的金标准，但耗时长，快速生长菌也至少需7天才有阳性结果，时间长者甚至需要数周，而且由于标本处理过程可能导致细菌死亡，产生假阴性结果。另外，免疫学和血清学技术也因其低灵敏度和特异性而受到限制。随着分子生物学的飞速发展，越来越多的分子生物学方法应用于检测结核分枝杆菌，主要包括PCR诊断、DNA指纹技术等。而随着FQ-PCR技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸释放剂在结核分枝杆菌TB检测中的应用，所述核酸释放剂包含莎梵婷（surfactin）0.01~0.5mM/L，氯化钾20~300mM/L，十二烷基磺酸钠0.01~2%和乙醇0.05~1%。

【技术特征摘要】
1.一种核酸释放剂在结核分枝杆菌TB检测中的应用，所述核酸释放剂包含莎梵婷(surfactin)0.θΓθ.5mM/L，氯化钾 2(T300mM/L，十二烷基磺酸钠 0.01 2% 和乙醇 0.05 1%。2.一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒，所述试剂盒中包括核酸释放剂和PCR反应液，所述核酸释放剂包含莎梵婷(surfactin) 0.θΓθ.5mM/L,氯化钾2(T300mM/L，十二烷基磺酸钠0.0f 2%和乙醇0.05^1% ;所述PCR反应液中包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游弓I物和用于靶多核苷酸检测的探针。3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，用于靶多核苷酸的上游引物序列为5’ -ACGGATAGGGGATCTCAGTACAC-3’，用于靶多核苷酸的下游引物序列为5’-CGTCTCGGCTAGTGCATTGTC-3’ 。4.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征在于，用于靶多核苷酸的探针序列为5’-FAM-TTCCGACCGCTCCGACCGAC-BHQ1-3’ 。5.根据权利要求2 4中任意一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括内标，所述内标序列为 5，-GTGTCTGCGGCGTTTTATCATCTTCCTCTGTCATCCAGTGCAAGTCTTGATCCTGTCGTTGGTTCTTCTGGACTATCAAGGTATGTTGCCCGTTTGT-3，。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴立忠，邓中平，吴康，
申请(专利权)人：湖南圣湘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：