【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于血液分子生物学领域，具体涉及一种L型PML/RARa融合基因检测试剂盒及相应的检测方法。
技术介绍
白血病是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病。其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段。在骨髓和其他造血组织中白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制，临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润症状。染色体异常是白血病发生的常见原因之一。根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢性两大类。急性白血病的细胞分化停滞在较早阶段，多为原始细胞及早幼细胞，病情发展迅速。其中急性早幼粒细胞白血病(AcutePromyelocytic Leukemia, APL)是一种常伴发严重出血的急性白血病,95%以上的APL发生特异性的染色体易位t (15 ；17) (q22 ；ql2 21)，导致15号染色体上的早幼粒细胞白血病((Promyelocytic leukemia, PML)基因与17号染色体上的维甲酸受体a (Retinoicacid receptor α , RARa)基因融合产生PML / RARa融合基因。依据PML基因内部断点不同，可分为L、S和V型三种，其中L型PML /RARa融合基因为主要类型，约占70 80%。分子生物学研究表明，PML / RARa融合基因是APL高度特异性的分子标志物，是APL患者发病的重要机制之一，已作为APL MICM分型诊断的依据之一。近年来，随着维甲酸、三氧化二砷在临床上的应用，APL完全缓解(complete reminion, CR)率明显...
【技术保护点】
一种L型PML/RARα融合基因检测试剂盒，其特征是由以下成分组成：功能化氧化石墨烯、序列为5’FITC?TGACCTGCCATTGAG?3’的FITC标记的单链DNA、试剂Ⅰ、甲醛、皂角素、PBS缓冲液，试剂盒中各成分浓度及用量见表1，所列试剂的量为10个样本反应：?????????????????????????????????????????????????????????表1序号试剂名称体积ml说???明1功能化氧化石墨烯0.2浓度2mg/ml25’FITC?TGACCTGCCATTGAG?3’2浓度为1μmol/l；纯度为HPLC级别；5’端7个碱基位于PML基因，3’端8个碱基位于RARa基因3试剂Ⅰ7.8?4甲醛1.0浓度10%V/V5皂角素1.0浓度0.05%V/V6PBS缓冲液130浓度0.1mol/l其中试剂Ⅰ的组分及各成分浓度、用量见表2，?????????????????????????????????????????????????????????????表2。dest_path_image001.jpg
【技术特征摘要】
1.一种L型PML/RARd融合基因检测试剂盒，其特征是由以下成分组成:功能化氧化石墨烯、序列为5’ FITC-TGACCTGCCATTGAG-3’的FITC标记的单链DNA、试剂1、甲醛、皂角素、PBS缓冲液，试剂盒中各成分浓度及用量见表1，所列试剂的量为10个样本反应:2.—种L型PML/RARa融合基因的检测方法，该方法使用权利要求1的试剂盒，其特征是包括以下步骤: (1)细胞培养 将待测细胞接种于含10%胎牛血清的RPM1-1640培养液中，在37°C，5% CO2条件下培养，2 3天半量换液； (2)与细胞共孵育的孵育液制备 将功能化氧化石墨烯、序列为5’FITC-TGACCTGCCATTGAG-3’的FITC标记的单链DNA和试剂I混合即得到孵育液； (3)细胞预处理 A、将待测细胞收集到流式离心管中，于室温下1000 rpm离心5 min，弃去上清液；B、然后在上述流式离心管中加入100W甲醛，立刻混匀，...
【专利技术属性】
技术研发人员：李然，王宏伟，覃艳红，陈秀花，任方刚，张耀方，徐智芳，李莉，郭海秀，王晓娟，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：
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