一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法技术

本发明专利技术公开了一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤：(1)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。本发明专利技术具有灵敏度高、重复性好、准确性强、灵活性强、成本低的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测方法，尤其是一种高通量、准确定量、灵活性强、成本低的。
技术介绍
丙型肝炎病毒(HCV)感染者中有超过70%发展成慢性丙型肝炎，在10 20中有20% 50%进展成肝硬化，1% 2%发展成肝细胞肝癌，危害严重。丙型肝炎的抗病毒治疗是缓解和抑制肝硬化和肝癌的重要途径。但抗HCV药物昂贵，且对不同病情有不同用药标准，因此需要检测多种信息以辅助用药治疗。指导丙型肝炎的用药治疗的信息主要有血清丙型肝炎病毒RNA水平，丙型肝炎病毒的基因型和人类相关单核苷酸多态性(SNP)。只有联系病毒亚型类别、病毒在体内的复制水平和患者的个体信息综合分析，才能做到真正的对症下药。目前，主流的检测方法缺点是:技术成本昂贵、复杂:每个样品需要一个芯片，成本大于Y1000/样品，不利于大规模推广；探针的合成与固定比较复杂，特别是制作高密度的探针阵列，是主要的限速步骤。不能精确定量，重复性差。灵敏度较低:芯片法需核酸量较大，一般须先做多重PCR扩增，由于引物较多，容易自身产生二聚体，发夹结构，或由于Tm值不同，而导致扩增目的片段效率不同，进而影响检测的灵敏度。对于不同亚型的混合感染较难分辨。由于芯片的种类较多，难以制定一个统一的质量控制标准。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高通量、准确定量、灵活性强、成本低的。本专利技术采用如下技术方案:一种基于毛细电泳的丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤:(I)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。优选地，所述步骤(3)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后在一定温度下孵育的子步骤。优选地，所述步骤(3)中的孵育温度分别为48°C、42°C、95°C、4°C。优选地，所述步骤(4)包括按比例在样品板上加入试剂和样品、以及混匀后按一定温度进行热循环反应的子步骤。优选地，所述步骤⑷的子步骤中的热循环温度分别为94°C、60°C、70°C、4°C。优选地，所述步骤(5)包括制备GeXP遗传分析仪样品、准备分离液、毛细电泳分离样品、结果分析的步骤。本专利技术的有益效果为:1.采用激光诱导荧光-PMT，具有超高灵敏度，重复性好。2.GeXP采用毛细管电泳对PCR产物进行分离检测，可将精确分离一个碱基数量差异的片段，能有效分辨出特异性产物，避免假阳性。3.高通量检测:可以在一个反应当中同时检测丙型肝炎病毒的RNA水平和人类的SNP位点并检测，即一个反应获得三种用药治疗指导信息。4.精确定量:对病原体基因拷贝数的定量检测有着与荧光定量PCR同样的高精确性。5.灵活性强:可随时根据需求增加或修改所需研究的SNP位点。6.成本低:每个样品的检测成本少于Y50，包括了丙型肝炎病毒RNA定量检测、人类SNP位点的检测和感染病毒亚型多种信息，利于大规模推广。具体实施例方式下面根据实施例对本专利技术作进一步详细说明。本专利技术创立了一种同步检测丙型肝炎病毒RNA水平、人类相关SNP位点和感染丙型肝炎病毒亚型的多重基因检测方案。检测步骤(详见第四节:具体实施方式):采集患者样品(血样)，提取核酸，以之为模板进行反转录和PCR反应，最终用毛细电泳方法分离PCR产物。1.检测目标主要1.)定量检测样品丙型肝炎病毒RNA水平。参见表I2.)检测与丙型肝炎治疗用药相关的SNP位点:rsl2979860和rs8099917。3.)检测丙型肝炎病毒亚型:la、lb、2、2a、3a、3b、6共七种亚型。2.建立了可靠地样品质量及反应过程的对照。参见表II)人DNA和人RNA完整性的对照内参:确保在检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性。2)正常反应对照内参:监控PCR反应效率，避免假阴性。3.多重基因检测 的引物设计。参见表2表I多重检测目标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤：(1)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。

【技术特征摘要】
1.一种丙型肝炎治疗用药指导的多重基因检测方法，包括如下步骤:(1)生产“丙型肝炎治疗用药指导多重基因检测试剂盒”；(2)采集患者血液样品，并提取核酸；(3)以样品核酸为模板进行反转录；(4)以反转录产物为模板进行PCR反应；(5)以毛细电泳的方法分离样品。2.根据权利要求1所述的 检测方法，所述步骤(I)中的试剂盒包括:反转录引物管、PCR引物管、25mM氯化镁、DNA聚合酶、阳性对照。3.根据权利要求1所述的检测方法，所述步骤(3)包括按比例在样品板上...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴勇，颜进，
申请(专利权)人：海尔施生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：