一种感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株制造技术

本发明专利技术涉及一种感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株。本发明专利技术人首次成功地直接从丙肝患者血清中构建包含丙型肝炎病毒1b型结构基因的嵌合重组病毒。本发明专利技术为针对特定丙型肝炎病毒株的侵入、装配、中和抗体、药物和疫苗的研究提供了非常有用的工具和方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术以及病毒学领域；更具体地，本专利技术涉及一种感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株及其制备方法。 
技术介绍
全球丙型肝炎病毒(HCV)感染率约3%，慢性HCV感染会导致终末期肝病，包括肝硬化，肝衰竭及肝癌。至今尚无疫苗。目前标准的治疗方案包括聚乙二醇化干扰素α和利巴韦林联用，一些针对HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的小分子抑制剂也被开发出来。疗效与多因素有关，包括病毒及宿主因子，如病毒基因型，病毒载量及宿主在IL28B基因附近的单核苷酸多态性。 HCV属于黄病毒科，是有包膜的单股正链RNA病毒。其基因组长9.6kb，包括一个5’非翻译区(5’UTR)，开放读码框及3’非翻译区(3’UTR)。其开放读码框编码一个多聚蛋白，经剪切后得到结构蛋白(core，E1，E2)、p7及非结构蛋白(NS2，NS3，NS4A，NS4B，NS5A，NS5B)(Bartenschlager,R.等，2004.Advances in virus research63:71-180)。由于HCV病毒复制速率很快，它的依赖于RNA的RNA聚合酶保真度也不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氨基酸序列，其包括来自丙型肝炎病毒1b基因型的结构蛋白Core、E1、E2、p7和非结构蛋白NS2的第一个跨膜区，其特征在于，所述氨基酸序列具有与SEQ ID NO:1‑4中任何一条具有90%以上同源性的氨基酸序列，并且所述氨基酸序列具有选自以下至少一项条件或其任意组合：从N末端的氨基酸残基起算，第38位氨基酸为S；第180位氨基酸为T；第183位氨基酸为P；第184位氨基酸为R；第217位氨基酸为T；第253位氨基酸为F；第290位氨基酸为P；第364位氨基酸为T；第365位氨基酸为A；第397位氨基酸为R、第398位氨基酸为D；第405位氨基酸为L；第415位氨基酸为S；第416位氨基...

【技术特征摘要】
1.一种氨基酸序列，其包括来自丙型肝炎病毒1b基因型的结构蛋白Core、
E1、E2、p7和非结构蛋白NS2的第一个跨膜区，其特征在于，所述氨基酸序列具
有与SEQ ID NO:1-4中任何一条具有90%以上同源性的氨基酸序列，并且所述氨
基酸序列具有选自以下至少一项条件或其任意组合：
从N末端的氨基酸残基起算，第38位氨基酸为S；第180位氨基酸为T；第
183位氨基酸为P；第184位氨基酸为R；第217位氨基酸为T；第253位氨基酸
为F；第290位氨基酸为P；第364位氨基酸为T；第365位氨基酸为A；第397
位氨基酸为R、第398位氨基酸为D；第405位氨基酸为L；第415位氨基酸为S；
第416位氨基酸为A；第476位氨基酸为T；第531位氨基酸为G；第532位氨基
酸为S；第785位氨基酸为E；第827位氨基酸为V；第835位氨基酸为C；第837
位氨基酸为L。
2.如权利要求1所述的氨基酸序列，存在选自以下的至少一项条件：
(i)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第364位氨
基酸为T、第476位氨基酸为T、第531位氨基酸为G；或
(ii)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第290位
氨基酸为P、第476位氨基酸为T、第531位氨基酸为G；或
(iii)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第180位
氨基酸为T、第837位氨基酸为L；或
(iv)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第38位氨
基酸为S、第183位氨基酸为P、第184位氨基酸为R、第217位氨基酸为T、
第365位氨基酸为A；第405位氨基酸为L、第415位氨基酸为S、第532位
氨基酸为S、第785位氨基酸为E，第827位氨基酸为V。
3.如权利要求2所述的氨基酸序列，其特征在于，(i)中，还包括：从N末端
的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第253位氨基酸为F；或
(ii)中，还包括：从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列
的第835位氨基酸为C；或
(iii)中，还包括：从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列

\t的第397位氨基酸为R、第398位氨基酸为D、第416位氨基酸为A。
4.如权利要求1-3所述的氨基酸序列，其特征在于，具有SEQ ID NO:5-11中
任一氨基酸序列。
5.编码如权利要求1-4任一项所述的氨基酸序列的多核苷酸，所述的多核苷
酸为DNA或RNA。
6.权利要求1-5任一所述的蛋白或编码其的多核苷酸的用途，用于制备重组
丙型肝炎病毒株，尤其是感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株。
7.一种用于制备重组丙型肝炎病毒株的重组病毒质粒，该重组病毒质粒包含
权利要求5所述的多核苷酸。
8.如权利要求7所述的重组病毒质粒，其特征在于，还包括丙型肝炎病毒基
因组的5’非翻译区、NS2第一跨膜区以外片段编码基因、NS3编码基因、NS4A编
码基因、NS4B编码基因、NS5A编码基因、NS5B编码基因和3’非翻译区。
9.如权利要求8所述的重组病毒质粒，其特征在于，所述的丙型肝炎病毒基
因组来自与权利要求1-5所述的丙型肝炎病毒蛋白或核酸来源不同的另一株丙型
肝炎病毒；较佳地，所述的另一株丙型肝炎病毒是JFH-1株。
10.一种制备具有体外复制感染能力的重组嵌合型丙型肝炎病毒的方法，其特
征在于，所述方法包括：
(a)提供如权利要求7-9任一项所述的重组病毒质粒；
(b)将步骤(a)的重组病毒质...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟劲，卢捷，陶万银，李瑞，向禹，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31