一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，特点是反转录引物包括九种呼吸道病原体的RT扩增引物及人RNA内参的反向引物，基因序列如SEQ?ID?NO.1～NO.6所示，PCR引物包括余下十三种呼吸道病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向扩增引物、反应内参的正反向扩增引物以及上述九种呼吸道病原体的PCR扩增引物与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.7～NO.44所示，优点是特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强、成本低、无假阴性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及呼吸道病原体的检测试剂盒及其检测方法，尤其是涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
呼吸道感染每年造成大量人群生病或死亡，尤其甲型流感病毒时有局部暴发或爆发性流行，对人民的健康及社会造成巨大威胁；其他病原体感染也会引起暴发流行。目前对呼吸道感染的最终诊断方法仍以病原体检查为主，往往在确诊上报之时，疫情已经有一定程度的传播。因此亟需建立呼吸道病原体快速高效的诊断方法。目前，我国呼吸道病原体的传统检测方法主要包括以下几种:(1)病原体检查:即直接做影像及活组织检查，或病原体分离培养，之后在显微镜、电镜下观察，做出诊断。优点是成本低，对实验室硬件要求低。但存在如下缺点:1)耗时长:一般需3-5天或更长。2)诊断效率低:只能每个菌单独培养；对一些表型特征变异的病原体，用形态学经验很难辨别；此外，由于抗生素的滥用，细菌在检测过程中生长受到抑制，导致假阴性的结果；3)工作量巨大:由于对每个抽检样品的每种菌都必须进行检测，工作量非常巨大，特别是部分对培养环境要求较为苛刻的菌，更加大了检测的工作量和难度。(2)免疫学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒，包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液，10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于：所述的反转录引物包括以下表中九种呼吸道病原体的RT扩增引物及人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括以下表中余下十三种呼吸道病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述九种呼吸道病原体的PCR扩增引物及人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示：

【技术特征摘要】
1.一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒，包括DEPC水、5 X RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液，IOXPCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于:所述的反转录引物包括以下表中九种呼吸道病原体的RT扩增引物及人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括以下表中余下十三种呼吸道病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述九种呼吸道病原体的PCR扩增引物及人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示:2.根据权利要求1所述的一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒，其特征在于:所述的X溶液为包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA ;反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向扩增引物带荧光标记。3.根据权利要求1所述的一种同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒，其特征在于:所述的阳性对照品连接有设计上述二十二种呼吸道病原体、RNA内参、DNA内参和反应内参的引物的基因保守序列的PMD18-T的克隆载体。4.一种利用权利要求1-3中任一项所述的同步检测二十二种呼吸道病原体的试剂盒的检测呼吸道病原体的方法，其特征在于具体包括以下步骤: (1)采集样本并提取核酸 采集呼吸道感染患者的鼻咽拭子或痰液的分离培养物，从分离培养物中提取核酸； (2)以患者核酸为模板进行RT反应 取5-20ng/ul的核酸样品RNA5 u L，DEPC水8uL,5XRT缓冲液4 y L，RT引物溶液2 u L,RT酶Iii L混匀后加入到96孔样品板上进行反转录，反应条件:48...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴勇，黄迎彬，南丽，
申请(专利权)人：海尔施生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：