禽博尔纳病毒检测用引物组、试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提供一种禽博尔纳病毒检测用引物，所述引物组是以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。本发明专利技术还公开了一种禽博尔纳病毒检测试剂盒及其使用方法，采用本发明专利技术的技术方案能够高效、准确地对禽博尔纳病毒进行检测，从而广泛地运用于此类病源的检验检疫，也为研究这种RNA病毒在宿主体内致病机制的动物模型打下基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测试剂，具体涉及一种禽博尔纳病毒检测用的引物、试剂盒及其使用方法。
技术介绍
禽博尔纳病毒(AvianBornavirus, ABV)是从腺胃扩张症(ProventricularDilatation Disease，H)D)患病鹦鹉体内分离的一种新的博尔纳病毒(BDV)。BDV可在宿主中枢神经系统内持续感染，其全部生活史在神经元细胞核内完成，病毒感染后基因与宿主细胞染色体融合，可在宿主基因组内检出病毒DNA序列。禽类是BDV重要自然疫源地，曾在鸟类活动池塘中收集的粪便样品中检出病毒株。据记载，1970年代首次报道发生TOD，最初主要在北美洲笼养鹦鹉中发生。由于广泛的商贸活动，使得PDD在宠物鸟中持续传播，世界各地均有报道，出现50余种鹦鹉感染发病。此外，巨嘴鸟、加拿大鹅、鸵鸟、番鸭、鸽、鹩哥、猫头鹰、游隼、鹫、密雀、织雀及其它雀形目鸟类已经检出病毒。研究显示ABV可侵入禽类神经系统，导致PDD类非化脓性炎症，主要影响胃肠道上部自主神经系统功能，包括食道、嗉囊、腺胃、肌胃、十二指肠等。其中腺胃扩张受到影响，不能正常蠕动，微生物在其中过度繁殖，导致动物出现败血症和死亡。患病禽鸟常见消瘦、食欲减退、异嗜、食物返流、粪内出现未消化食物、腹泻、腹部肿大、肌肉萎缩、多尿等。也可见中枢神经症状，如共济失调、头部运动失常、本体感受不足、运动无力等。总之，目前PDD在世界各国广泛分布，致死率很高，使鹦鹉等各种珍稀禽鸟受到极大威胁。因此，如果能够有效地对PDD病毒分离鉴定，不仅能够广泛地运用于此类病源的检验检疫，也为研究这种RNA病毒在宿主体内致病机制的动物模型打下基础
技术实现思路
本专利技术的所解决的技术问题在于提供一种用于环介导等温扩增技术检测禽博尔纳病毒，且对禽博尔纳病毒基质蛋白基因具有高特异性的检测用引物组。本专利技术的所解决的技术问题还在于提供一种利用环介导等温扩增技术检测禽博尔纳病毒的试剂盒，其检测效果良好、特异性高、漏检率低；同时本专利技术还提供了所述试剂盒的使用方法。本专利技术的目的可以通过以下技术措施实现:一种禽博尔纳病毒检测试剂盒，所述引物组是以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物:内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。优选地，所述引物组为如下引物组合的其中之一:外引物F3 (ID19):GCCGACATTAATGCTTGA,外引物B3(ID19): CCAAGAAGTCATCAATCTGAA,内引物FIP(ID19):GGTTCCTTTACTGAAAGGAAAGGTACTTTGTTGGCGGAACTT，内引物BIP(ID19):CTACAGCTACCAAGAGAAAAACGGGTAAACATTCGCAGGTGAAT ；或外引物F3(ID30): CTAAACATACCTTTCCTTTCAGT,外引物B3(ID30):GGATCCTTGTAGACAGCTAT,内引物FIP(ID30):TCGACATCAATGGTGAAGTGGTAAGGAACCTCTACAGCTACC，内引物BIP (ID30):GGCATTCACCTGCGAATGTTGAGTTCAGTGTTGAGGCC ；或外引物F3(ID37):TCCTTTCAGTAAAGGAACCTC,外引物B3(ID37):CCTTATCGGATCCTTGTAGAC,内引物FIP(ID37):CGCTAGGCTCGACATCAATGTACAGCTACCAAGAGAAAAACG,内引物BIP(ID37):GGCATTCACCTGCGAATGTTGCTATAGAGTTCAGTGTTGAGG。本专利技术的提供的一种禽博尔纳病毒检测试剂盒，所述禽博尔纳病毒检测试剂盒包括以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物:内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。优选地，所述引物组为如下引物组合的其中之一:外引物F3(ID19):GCCGACATTAATGCTTGA,外引物B3(ID19):CCAAGAAGTCATCAATCTGAA,内引物FIP (IDl9):GGTTCCTTTACTGAAAGGAAAGGTACTTTGTTGGCGGAACTT，内引物BIP (ID19):CTACAGCTACCAAGAGAAAAACGGGTAAACATTCGCAGGTGAAT ；或外引物F3(ID30):CTAAACATACCTTTCCTTTCAGT,外引物B3(ID30):GGATCCTTGTAGACAGCTAT,内引物 FIP(ID30):TCGACATCAATGGTGAAGTGGTAAGGAACCTCTACAGCTACC，内引物BIP(ID30):GGCATTCACCTGCGAATGTTGAGTTCAGTGTTGAGGCC ；或外引物F3(ID37):TCCTTTCAGTAAAGGAACCTC,外引物B3(ID37):CCTTATCGGATCCTTGTAGAC,内引物FIP(ID37):CGCTAGGCTCGACATCAATGTACAGCTACCAAGAGAAAAACG，内引物BIP(ID37):GGCATTCACCTGCGAATGTTGCTATAGAGTTCAGTGTTGAGG。 作为本专利技术禽博尔纳病毒检测试剂盒的优选实施方式，所述的禽博尔纳病毒检测试剂盒还包括Bst DNA聚合酶、逆转录酶、反应液、稳定液、样品预处理液、显色液和阳性对照液。作为本专利技术禽博尔纳病毒检测试剂盒更优选的实施方式，所述引物组中引物与反应体系混合后的浓度为:所述的内引物FIP/BIP各为0.016 0.032 μ mol/L,外引物F3/B3的浓度各为0.004 0.008 μ mol/L。本专利技术还提供一种禽博尔纳病毒检测试剂盒的使用方法，该方法包括如下步骤:(I)制备待测样品RNA ；(2)在反应容器中加入Bst DNA聚合酶、逆转录酶、反应液、稳定液、待测样品RNA、内引物FIP/BIP、外引物F3/B3，恒温反应；(3)在上述反应容器和阳性对照中分别加入显色液，混匀，样品组显色与对照组相同则为阳性，否则为阴性；所述步骤(2)中的内引物FIP/BIP和外引物F3/B3为以禽博尔纳病毒的基质蛋白基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物。优选地，其特征在于，所述引物组中引物与反应体系混合后的浓度为:所述的内引物 FIP/BIP 各为 0.016 0.032 μ mol/L,外引物 F3/B3 的浓度各为 0.004 0.008 μ mol/L0作为本专利技术使用禽博尔纳病毒检测试剂盒的方法的优选实施方式，所述的两对引物为所述的两对引物为如下引物组合中的一组:外引物F3(ID19):GCCGACATTAATGCTTGA,外引物B3(ID19):CCAAGAAGTCATCAATCTGAA,内引物FIP(ID19):GGTTCCTTTACTGAAAGGAAAGGTACTTTGTTGGCGGAACTT,内引物BIP(ID19):CTACAGCTACCAAGAGAAAAACGGGTAAACATTCGCAGGTGAAT ；或外引物F3(ID30):CTAAACATACCTTTCCTTTCAGT,外引物B3(ID30):GGATCCTTG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽博尔纳病毒检测用引物组，其特征在于，所述引物组是以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。

【技术特征摘要】
1.一种禽博尔纳病毒检测用引物组，其特征在于，所述引物组是以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物:内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。2.根据权利要求1所述的禽博尔纳病毒用引物组，其特征在于，所述引物组为如下引物组合的其中之一: 外引物F3 (ID19):GCCGACATTAATGCTTGA, 外引物B3 (ID19):CCAAGAAGTCATCAATCTGAA, 内引物 FIP (ID19):GGTTCCTTTACTGAAAGGAAAGGTACTTTGTTGGCGGAACTT, 内引物 BIP (ID19):CTACAGCTACCAAGAGAAAAACGGGTAAACATTCGCAGGTGAAT ； 或 外引物F3 (ID30):CTAAACATACCT TTCCTTTCAGT, 外引物B3 (ID30):GGATCCTTGTAGACAGCTAT， 内引物 FIP (ID30):TCGACATCAATGGTGAAGTGGTAAGGAACCTCTACAGCTACC, 内引物 BIP (ID30):GGCATTCACCTGCGAATGTTGAGTTCAGTGTTGAGGCC ； 或 外引物F3 (ID37):TCCTTTCAGTAAAGGAACCTC， 外引物B3 (ID37):CCTTATCGGATCCTTGTAGAC, 内引物 FIP (ID37):CGCTAGGCTCGACATCAATGTACAGCTACCAAGAGAAAAACG, 内引物 BIP (ID37):GGCATTCACCTGCGAATGTTGCTATAGAGTTCAGTGTTGAGG。3.一种禽博尔纳病毒检测试剂盒，其特征在于，所述禽博尔纳病毒检测试剂盒包括以禽博尔纳病毒基质蛋白基因为靶基因，基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物:内引物FIP/BIP 和外引物 F3/B3。4.根据权利要求3所述的禽博尔纳病毒检测试剂盒，其特征在于，所述引物组为如下引物组合的其中之一: 外引物F3 (ID19):GCCGACATTAATGCTTGA, 外引物B3 (ID19):CCAAGAAGTCATCAATCTGAA, 内引物 FIP (ID19):GGTTCCTTTACTGAAAGGAAAGGTACTTTGTTGGCGGAACTT, 内引物 BIP (ID19):CTACAGCTACCAAGAGAAAAACGGGTAAACATTCGCAGGTGAAT ； 或 外引物F3 (ID30):CTAAACATACCTTTCCTTTCAGT, 外引物B3 (ID30):GGATCCTTGTAGACAGCTAT， 内引物 FIP (ID30):TCGACATCAATGGTGAAGTGGTAAGGAACCTCTACAGCTACC, 内引物 BIP (ID30):GGCATTCACCTGCGAATGTTGAGTTCAGTGTTGAGGCC ； 或 外引物F3 (ID37):TCCTTTCAGTAAAGGAACCTC， 外引物B3 (ID37):CCTTATCGGATCCTTGTAGAC, 内引物 FIP (ID37):CGCTAGGCTCGACATCAATGTACAGCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：林志雄，田纯见，王宏，罗琼，赵吟，罗长保，鱼海琼，刘志玲，陈茹，吴晓薇，朱道中，
申请(专利权)人：广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：