DC-CIK细胞分离培养试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种DC-CIK细胞分离培养试剂盒及其应用，该试剂盒包括：淋巴细胞分离液、外周血样处理液、CIK细胞诱导增殖体系、DC诱导增殖体系、细胞培养瓶包被体系、淋巴细胞培养基GT-T551以及细胞培养袋；其在分离和培养DC-CIK细胞中的应用，具体步骤如下：外周血样单核细胞的分离、DC和CIK细胞的分离、DC细胞的诱导增殖、CIK细胞的诱导增殖以及DC与CIK细胞的共培养。本发明专利技术试剂盒分离所得淋巴细胞具有很高的纯度和活性、CIK细胞增殖速度快、CD3+CD56+双阳性细胞比例高、操作方法简单，条件易控，可广泛应用于人和哺乳动物DC-CIK细胞的分离培养。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及用于分离和培养DC-CIK细胞的试剂盒及其应用。
技术介绍
以肿瘤免疫治疗为核心的生物治疗已成为继手术、放疗和化疗之后的第四种治疗模式。该治疗模式是采用患者自体免疫细胞进行诱导，刺激或辅助人体自身免疫系统，从而完善和增强患者的免疫机能，且治疗手段安全，基本无毒副作用，因此于近年来显示出良好的应用前景。 DC-CIK联合治疗是目前肿瘤生物治疗中最成熟的治疗方案之一。DC(树突状细胞)是迄今发现的功能最强大的抗原提呈细胞，可高效准确识别肿瘤抗原并将信息传递给人体免疫系统，在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要作用；DC主要由骨髓中的髓样干细胞和淋巴样干细胞分化而来，数量较少，仅占外周血单核细胞数量的1%以下。CIK细胞(细胞因子诱导的杀伤细胞)是一种新型免疫活性细胞，兼有T淋巴细胞的强大抗肿瘤活性和NK细胞(自然杀伤细胞)的非主要组织相关性复合物限制性杀瘤的特点，对肿瘤细胞的杀伤活性可达84. 7% ;CIK细胞主要由⑶3+⑶56+和⑶3+⑶8+ T细胞亚群组成，其中⑶3+⑶56+ T细胞为自然杀伤活性T细胞(NKT细胞)，在正常人外周血中含量极少，具有抗肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DC?CIK细胞分离培养试剂盒，其特征在于包括：（1）淋巴细胞分离液；（2）外周血样处理液：包括含有质量百分浓度为1~3%牛血清白蛋白的D?PBS缓冲液；（3）CIK细胞诱导增殖体系：包括CD3、白细胞介素?1和白细胞介素?2；（4）DC诱导增殖体系：包括GM?CSF和白细胞介素?4；（5）细胞培养瓶包被体系：包括纤粘连蛋白和γ干扰素；（6）淋巴细胞培养基GT?T551；（7）细胞培养袋。

【技术特征摘要】
1.ー种DC-CIK细胞分离培养试剂盒，其特征在于包括 (1)淋巴细胞分离液； (2)外周血样处理液包括含有质量百分浓度为广3%牛血清白蛋白的D-PBS缓冲液； (3)CIK细胞诱导增殖体系包括⑶3、白细胞介素-1和白细胞介素-2 ； (4)DC诱导增殖体系包括GM-CSF和白细胞介素_4 ； (5)细胞培养瓶包被体系包括纤粘连蛋白和Y干扰素； (6)淋巴细胞培养基GT-T551； (7)细胞培养袋。2.权利要求I所述DC-CIK细胞分离培养试剂盒在分离和培养DC-CIK细胞中的应用，其特征在于具体步骤如下(I)外周血样单核细胞的分离取新鮮的人外周血样，在其中加入血液抗凝剂后制得抗凝血样；向所述抗凝血样中加入1/3 2/3体积的所述外周血样处理液，充分混匀，用f I. 5倍体积的所述淋巴细胞分离液分离所得混合液中的单个核细胞，并用所述淋巴细胞培养基GT-T551调节所述单个核细胞密度至1 5X IO6个/mL，得到外周血单核细胞悬液；将所述外周血单核细胞悬液用所述外周血样处理液洗涤，于室温离心5 10 min,转速150(T2000r/min，取白膜层细胞； (2)DC和CIK细胞的分离 向步骤(I)所得白膜层细胞中加入含有5 10%自体血清的所述淋巴细胞培养基GT-T551，将所得细胞混悬液接种至所述纤粘连蛋白预包被的细胞培养瓶，为瓶A，并于细胞培养箱中进行细胞培养；f5h后，将瓶A中的悬浮细胞接种至所述Y干扰素预包被的细胞培养瓶，为瓶B ; (3)DC细胞的诱导增殖 向瓶A中的贴壁细胞加入含有5 10%自体血清的所述淋巴细胞培养基GT-T551，并同时加入终浓度为50(T750U/mL的所述GM-CSF以及终浓度为50(Tl000U/mL的所述白细胞介素_4，于细胞培养箱中进行细胞培养；培养过程中每三天更换一次含有5 10%自体血浆的所述淋巴细胞培养基GT-T551，同时再次加入上...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐来俊，
申请(专利权)人：江阴齐氏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：