用于在免疫测定中减少白细胞干扰的试剂制造技术

本发明专利技术提供了用于在分析物免疫测定中减少来自白细胞的干扰的方法和装置。在一个实施方案中，提供了包括如下步骤的方法：利用一种或多种减少或消除白细胞的代谢活性的杀白细胞试剂修正生物样本例如全血样本，并且对所述修正样本进行免疫测定以测定所述样本中分析物的浓度。优选地，利用一种或多种酶以及任选地一种或多种酶底物和辅因子修正所述样本。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在通过免疫测定法测定血液样本的分析物的存在或浓度的装置和方法中减少或消除来自血沉棕黄层组分特别地白细胞的干扰。具体地，本专利技术涉及通过利用减少或消除白细胞的活性的杀白细胞(Ieukocidal)试剂修正(amend)血液样本来减少或消除白细胞免疫传感器干扰。
技术介绍
对生物样本进行许多针对目标分析物的实验室免疫测试以除其它原因以外，进行诊断、筛选、疾病分期、法医分析、妊娠试验和药物测试。虽然少数定性测试例如妊娠试验已被简化成供患者家庭使用的简单试剂盒，但大多数定量测试仍然需要受过训练的技术人员在实验室环境中使用尖端仪器的专门技术。实验室测试增加了分析成本并且延迟了患者的结果接收。在许多情况下，该延迟对患者的病况或预后例如表示心肌梗塞和心力衰竭的标志物的分析可以是有害的。在这些和相似的临床状况下，有利的是即时、精确、经济地以及以最短的延迟进行此类分析。已描述了许多类型的免疫测定装置和方法。例如，用于成功地测量血液样本中的分析物的一次性使用的传感装置由Lauks公开于美国专利No. 5，096，669中。用于成功地测量特征(例如凝血时间)的其它装置由Davis等公开于美国专利No. 5，628，961和5，447，440中。这些装置利用读出设备和适合放入读出设备以测量作为时间的函数的血液样本中的分析物浓度和粘性改变的测试盒(cartridge)。将美国专利No. 5，096，669、5，628，961和5，447，440的整个内容和公开内容通过引用整体并本文。Miller等的美国专利申请公布2006/0160164描述了利用免疫-参考电极的免疫测定装置；Miller等的美国专利No. 7，682，833描述了具有改进的样本闭包(sampleclosure)的免疫测定装置；Emerson Campbell等的美国专利申请公布2004/0018577描述了多重混合免疫测定；以及Davis等的美国专利No. 7，419，821描述了用于分析物测量和免疫测定的设备和方法，所述专利申请公布或专利的每一个是共同拥有的并且通过引用整体并入本文。非竞争性双位免疫测定(Non-competitive two-site immunoassay),也称为夹心型免疫测定，通常用于测定生物测试样本中的分析物浓度，以及用于例如由Abbott Pointof Care Inc.开发的即时分析物检测系统i_STAT .免疫测定系统。在典型的双位酶联免疫吸附测定(ELISA)中，将一种抗体结合于固体载体以形成固定或捕获抗体，并且将第二抗体缀合于或结合于信号发生试剂例如酶以形成信号或标记抗体。在与包含待测量的分析物的样本反应后，分析物“被夹在”固定抗体与信号抗体之间。在洗去样本和任何非特异性结合的试剂后，测量保留在固体载体上的信号抗体的量，并且该量应当与样本中的分析物的量成正比。电化学检测也已被用于免疫测定，在所述电化学检测中分析物的结合直接或间接引起邻近电极的电活性种类的活性的改变。关于电化学免疫测定的综述，参见Laurell等，Methods in Enzymology,第 73 卷，“Electroimmunoassay，，，Academic Press, New York,339，340，346-348(1981)。在电化学免疫传感器中，分析物与其同源抗体的结合使电极上的电活性种类的活性产生变化，将所述电极保持在适当的电化学电位下以引起电活性种类的氧化或还原。存在许多满足这些条件的构型或排列。例如，可将电活性种类直接连接于分析物，或可将抗体共价连接于从无电活性底物产生电活性种类或破坏电活性底物的酶。关于电化学免疫传感器的综述，参见，M. J. Green (1987)，Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sc1. , 316 :135-142。差分安培计测量(differential amperometrie measurement)的概念在电化学领域是熟知的。参见，例如，Cozzette等的共同拥有的美国专利No. 5，112，455，将其通过引用整体并入本文。一种形式的差分安培计传感器组合公开于Cozzette等的共同拥有的美国专利No. 5，063，081 ( “ ‘081专利”)，将其通过引用整体并入本文。‘081专利还公开了选择性渗透层用于电化学传感器的用途和成膜性胶乳用于固定生物活性分子的用途。聚(乙烯醇)(PVA)在传感器制造中的用途描述于Davis等的美国专利No. 6，030, 827中，将其通过弓I用整体并入本文。Vikholm等的美国专利申请公布2003/0059954 (将其通过弓I用整体并入本文)教导了直接连接于表面的抗体，所述表面在其上的抗体之间的空隙中具有生物排斥或生物分子排斥涂层，例如PVA。Johansson等的美国专利No. 5，656，504教导了其上固定有抗体的固相，例如PVA，并将所述专利通过引用整体并入本文，以及Davis等的美国专利No. 6，030, 827和6，379，883教导了用于使PVA层形成图形的方法，并将所述专利通过引用整体并入本文。在本领域熟知免疫测定易于受各种形式的干扰。共同拥有的未决的美国申请No. 12/411，325 ( “‘325申请”)例如阐明了通过将IgM包含在IgG试剂混合物中减轻来自异嗜性抗体的干扰。‘325申请通过引用整体并入本文。随着免疫测定技术日益适合进入即时测试市场，将全血用作测试介质相对于血浆和血清(通常用于中心实验室测试)已得到增加。当分析全血时，红细胞和血沉棕黄层组分存在于测定介质中。本领域技术人员公认血沉棕黄层是当将血液离心时在红细胞上方形成的一层白细胞和血小板。已发现，在某些测定中，可针对白细胞有效地使各种测定组分例如珠粒和电极表面接受调理素作用。例如，对于电极表面，Hill等(FEBS 191，257-263，1985)利用人IgG使微伏安电极(microvoltammetric electrode)接受调理素作用，以基于超氧离子的电化学检测观察人嗜中性粒细胞的呼吸暴发。美国专利申请公布2006/0160164( ‘164申请)(上文中引用的)论述了电化学免疫传感器，全血与血浆之间的偏差，并且提供了标记物例如肌钙蛋白等的免疫测定通常被测量和报告为血浆或血清值。‘164申请教导当将这些免疫传感器用于分析全血时，需要使用消除偏差的校正系数或装置。‘164申请还教导该偏差的某些方面可被消除，包括在全血电化学免疫测定中与血沉棕黄层的组分相关的偏差，以及还有与样本之间的血细胞比容变化相关的偏差。如‘164申请中提供的，白细胞(或白血细胞(white cell))干扰在具有用分析物抗体例如肌钙蛋白抗体包被的珠粒的免疫传感器上发生，并且对照实验已显示该正偏差在血浆样本和其中已除去血沉棕黄层的血液样本中不存在。因此，白细胞似乎能够粘附免疫传感器并且促进酶标记抗体的非特异性结合，所述酶标记抗体甚至在洗涤步骤后仍然结合。在‘164申请中，已显示该偏差可通过在珠粒制备过程中将少量抗体添加至人血清白蛋白来部分消除。因此，当样本接触经修饰的珠粒时，来自样本的白蛋白快速地涂覆珠粒并且一旦它们本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.30 US 12/771,6341.一种进行血液样本中的靶分析物的免疫测定的方法，包括使血液样本与杀白细胞试剂接触，其中所述试剂大体上抑制所述样本中白细胞的活性；和对所述样本进行免疫测定以检测靶分析物。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述杀白细胞试剂为代谢杀白细胞试剂。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述杀白细胞试剂为非离子性的。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述活性为吞噬作用。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为氧和葡萄糖消耗试剂。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为葡糖氧化酶。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为葡糖氧化酶和葡萄糖。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为葡糖氧化酶和葡萄糖，并且所述试剂与所述样本混合以提供高于约3IU/mL的葡糖氧化酶活性和高于约500mg/dL的葡萄糖浓度。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为葡糖氧化酶和电子受体。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂包括己糖激酶和腺苷_5’-三磷酸 (ATP)的来源。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂包括己糖激酶、肌酸激酶、腺苷二磷酸 (ADP)和磷酸肌酸。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂包括葡糖脱氢酶。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂包括葡糖脱氢酶、NAD、NADH氧化酶和电子受体。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为氧消耗试剂。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为选自连二亚硫酸酯、葡糖氧化酶和抗坏血酸氧化酶的氧消耗试剂。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为线粒体电子传递抑制剂。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为线粒体膜解偶联剂。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂选自氰化物、抗霉素、鱼藤酮、丙二酸酯、擬基氰化物对_[ 二氟甲氧基]_苯基_腙、2,4- 二硝基酌■和寡霉素。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为两亲性试剂。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为两亲性试剂并且为皂苷。21.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为杀白细胞素。22.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为粘多糖。23.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为AHN-1抗体。24.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂为脂皮质素-1。25.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫测定为通过使所述样本与免疫传感器接触而进行的夹心测定，所述免疫传感器包含固定的针对所述靶分析物的第一抗体和标记的针对所述靶分析物的第二抗体。26.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫测定为通过使所述样本与免疫传感器接触而进行的竞争性测定，所述免疫传感器包含固定的针对所述靶分析物的第一抗体和标记的祀分析物。27.根据权利要求I所述的方法，其中使所述样本与针对白细胞易受调理素作用的珠 粒接触。28.根据权利要求I所述的方法，其中所述试剂为葡糖氧化酶和葡萄糖，并且使所述样 本与针对白细胞易受调理素作用的珠粒接触。29.根据权利要求I所述的方法,其中所述样本为全血样本。30.根据权利要求I所述的方法，其中所述样本利用抗凝剂进行修正。31.根据权利要求I所述的方法，其中所述分析物选自Tnl、TnT、BNP、NTproBNP, proBNP、HCG, TSH、NGAL、茶碱、地高辛和苯妥英...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·L·E·坎贝尔，G·戴维斯，J·E·欧马科尔，A·R·莫斯，G·古哈多斯，
申请(专利权)人：雅培医护站股份有限公司，
类型：
国别省市：