本公开内容涉及用于检测生物样品中PNHII型细胞群的方法以及根据患者血液中PNHII型细胞的百分比确定患者是否处于发生血小板减少症或血栓形成的风险增加的状态的方法。本公开内容的特征还在于用于所述方法的试剂和缀合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的领域是医学、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。直量 阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是罕见的衰弱性疾病，其特征尤其为血细胞生成异常、补体介导的血管内溶血和血栓形成倾向。參见例如Rosse和Nishimura (2003) IntJ Hematon] (2、: 121-124 和 fcodsky (2008) Blood Rev22(2) : 65-74。PNH 由 X 连锁磷脂酸肌醇聚糖互补型 A 类(phosphatidylinositol glycan complementation class A,PIGA)基因中的体细胞突变引起，该基因编码糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚生物合成最初步骤所必需的酶。參见 Miyata 等(I"3) ^^/7^259:1318-1320 和 Bessler 等(1994) EMBOゾ益:110-117。GPI锚(GPI anchor)将许多蛋白质与造血细胞表面连接。这些所谓的GPI锚定蛋白(GPI-anchored protein)尤其包括补体调节蛋白，例如CD55 (DAF)和CD59。根据发生在PIGA基因上的突变的类型，可导致GPI锚生物合成的部分丧失或完全丧失，其相当于细胞表面上GPI锚定蛋白(例如GPI锚定的CD55和CD59)存在的部分丧失或完全丧失。參见Rosse (1997)63-93。红细胞(RBC)表面上补体调节蛋白的部分或完全缺乏导致这些细胞对补体介导的裂解的敏感性升高和受累患者中PNH的相关症状。參见 Nicholson-Weller 等(1983) Proc Natl AcacI Sci [/SA80:5066-5070 和 Yamashina 等(1990) N Eml λ ifeJ323:1184-1189。传统上，PNH的诊断和PNH患者的监测包括采用流式细胞术，对RBC和粒细胞表面上的 CD55 和 CD59 表达进行分析。Sutherland 等(2009) Am J Clin / 从132:564-572。最近研发的PNH诊断方法采用了重组的非裂解形式的细菌蛋白质气单胞菌溶素，其与造血细胞表面上的GPI锚结合。參见授予Buckley和Brodsky的美国专利号6，593，095。传统的和新的方法两者皆可供医学从业人员将PNH患者的RBC或白细胞分成以下三类之ー 1型细胞，其具有正常或几乎正常的细胞表面表达的GPI锚定蛋白；PNH III型细胞，其没有或完全缺乏细胞表面表达的GPI锚定蛋白；和PNH II型细胞，其具有中等水平的细胞表面表达的GPI锚定蛋白。Brodsky等(2000) Am J Clin / 从114:459-466。由于白细胞谱系中的II型细胞难以与正常I型白细胞相区别开来，因此未对这些细胞进行表征。本公开内容至少部分基于本专利技术人的以下发现与不具有PNH II型细胞群或具有白细胞和红细胞分别少于I. 2%或0. 02%的PNH II型细胞群的患者相比，具有至少I. 2%的PNH II型白细胞群或至少0. 02%的PNH II型红细胞群的患者更可能患血小板减少症。患有因血小板破坏所致血小板减少症的患者极更可能发生血栓形成，而在PNH患者中，血栓形成是死亡的主要原因。因此，本公开内容提供用于根据患者中相对的PNH II型细胞群确定患者是否处于血小板减少症和/或血栓形成风险增加的状态的方法。部分通过开发检测PNH II型细胞的改进方法，辅助鉴定PNH II型细胞和血小板减少症之间的关系。因此，本公开内容还提供可用于在例如患者的生物样品中检测PNH II型细胞(例如II型白细胞和/或II型红细胞)的试剂和方法。本公开内容还提供用于根据患者中PNH II型细胞的存在情况或量诊断和治疗患者的方法。例如，本公开内容的特征在于根据在疑患PNH的患者的生物样品中检测的PNH II型白细胞的百分比而确定患者的血小板减少症的风险的方法。本文所述诊断方法具有优于现有技术方法的许多优势。例如，本文所述 方法可更有效地将PNH II型白细胞与I型细胞分离，这可供更准确和精密地测量生物样品中II型细胞的百分比，以及更准确地评价包含II型和III型细胞两者的PNH克隆的整体大小。另外，因为红细胞的高度更新(因对补体介导的裂解的敏感性升高所引起的PNH III型RBC固有的较短寿命)和PNH患者接受频繁的RBC输入，因此依赖于II型RBC上GPI表达的PNH诊断方法可能不可靠。因此，本文所述诊断方法不仅可供从业人员准确精密地量化生物样品中II型白细胞的百分比，从而量化样品中的异常克隆整体大小，而且该方法还比依赖于检测相对不稳定的PNH II型RBC群的现有方法更可靠。在一个方面，本公开内容的特征在于用于预测患者是否处于血栓形成风险增加的状态的方法。所述方法包括根据表明患者处于血栓形成风险增加的状态的患者的生物样品中相同组织学类型(相同谱系)的细胞总数的PNH II型细胞的百分比，确定患者是否处于血栓形成风险增加的状态。在另一个方面，本公开内容的特征在于用于预测患者是否可能是血小板减少性的方法。所述方法包括根据表明患者可能是血小板减少性的患者的生物样品中相同组织学类型(相同谱系)的细胞总数的PNH II型细胞(例如II型红细胞和/或II型白细胞)的百分比，确定患者是否可能是血小板减少性的。在另一个方面，本公开内容的特征在于用于确定患者是否处于血栓形成风险增加的状态的方法。所述方法包括提供(或接收)有关患者的生物样品中相同组织学类型(相同谱系)的总细胞的PNH II型细胞的百分比的信息；和确定患者是否处于血栓形成风险增加的状态，其中生物样品中相同组织学类型的细胞总数的PNH II型细胞的百分比表明患者处于血栓形成风险增加的状态。在另一个方面，本公开内容的特征在于用于预测患者是否处于发生血栓形成风险的状态的方法，所述方法包括测定患者的生物样品中PNH II型细胞的百分比；和提供患者是否处于血栓形成风险增加的状态的预测，其中生物样品中相同组织学类型的细胞总数的PNH II型细胞的百分比表明患者处于血栓形成风险增加的状态。在一些实施方案中，PNH II型细胞是白细胞(例如粒细胞或单核细胞)。在一些实施方案中，PNH II型细胞是红细胞。在本文所述任何方法的一些实施方案中，大于或等于I. 2%的PNH II型白细胞的百分比与大于或等于0. 02%的PNH II型红细胞的百分比的组合表明患者是否处于发生血栓形成的风险增加的状态或可能是血小板减少性的。在本文所述任何方法的一些实施方案中，当PNH II型白细胞的百分比为至少I. 2%(例如至少 I. 3,1. 4,1. 5,1. 6,1. 7,1. 8,1. 9,2,2. 1,2. 2,2. 3,2. 4,2. 5,2. 6,2. 7,2. 8,2. 9、3.3.1.3.2.3.3.3.4.3.5.3.6.3.7.3.8,3.9、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、65. 3%或70%以上)时，患者处于发生血栓形成的风险增加的状态(和/或可能是血小板减少性的)。在本文所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M莫瓦利亚，A伊林沃思，S法斯麦奈特，RP罗瑟，
申请(专利权)人：阿雷克森制药公司，
类型：发明
国别省市：
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