三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒及其操作方法技术

本发明专利技术公开了三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒及其操作方法。本发明专利技术试剂盒包括：PBS预处理液、RNA快速提取液和检测液。本发明专利技术采用了快速提取RNA的方法，加上预混检测液、试剂一次性使用等设计，通过简化的三步操作即可完成病毒检测，检测过程不易被污染，可操作性强。本发明专利技术设计的试剂盒检测结果可视化，适用于无专业知识的基层工作人员，可用于防控石斑鱼诺达病毒的流行，应用前景广泛，适合商业化生产。

【技术实现步骤摘要】
201610277466

【技术保护点】
一种三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：PBS预处理液、RNA快速提取液和检测液。

【技术特征摘要】
1.一种三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：PBS
预处理液、RNA快速提取液和检测液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测液含有AMV逆转录酶、RNase
抑制剂、核酸荧光染料、环介导等温扩增试剂和β诺达病毒的检测引物组。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的PBS预处理液是pH7.2±0.2的
PBS溶液；所述的RNA快速提取液是EpicentreBiotechnologies公司QuickExtractTMRNA
ExtractionSolution型号的试剂；所述的检测液为环介导等温扩增反应液，其20μl体系中
含有：8-10U/μlBst2.0聚合酶1μl，1-2U/μlAMV逆转录酶1μl，15-20U/μlRNase抑制
剂1μl，1.0-2.0mMdNTPs3.5μl，10×AmplificationBuffer2.5μl，6-8mMMgSO41.5μl，
1M甜菜碱5μl，10×SYTO-9染料0.5μl，0.2μM上游外引物F31μl，0.2μM下游外引物
B31μl，1.6μM上游内引物FIP1μl，1.6μM下游内引物BIP1μl；其中，10×Amplification
Buffer含有200mMTris-HCl、100mM(NH4)2SO4、500mMKCl、20mMMgSO4和1％Tween
20，PH8.8。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测液中β诺达病毒的检测引物组由
下列引物组成：
上游外引物F3：5’-GGTGCAGTCGTTGCCAAAT-3’，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄文，任春华，赵哲，胡超群，王艳红，陈廷，江晓，罗鹏，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44