本发明专利技术公开了检测非洲猪瘟病毒的PCR引物、试剂盒及其应用，属于非洲猪瘟病毒的检测领域。本发明专利技术首先根据GenBank上ASFV p72基因的保守区域设计了4对引物，从中筛选出特异性强、敏感性高的引物，该引物由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成。本发明专利技术进一步公开了用所述引物制备得到的检测非洲猪瘟病毒的试剂盒并建立了相应的PCR检测方法，本发明专利技术建立的检测方法比OIE推荐的两种非洲猪瘟病毒PCR检测方法更特异、更敏感；临床样品检测结果表明本发明专利技术PCR检测方法操作简单，成本低，特异性好，敏感性高，能有效的应用于非洲猪瘟的筛查和快速诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于检测非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)的PCR引物，还涉及所述PCR引物制备得到的试剂盒及其在非洲猪瘟病毒检测中的应用，属于非洲猪瘟病毒的检测领域。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起的家猪和野猪的烈性传染病，为世界动物卫生组织(OIE)规定必须申报的一类动物疫病，给疫区国家造成了巨大的经济损失(Costard,S.,Mur,L.,Lubroth,J.,Sanchez-Vizcaino,J.M.,Pfeiffer,D.U.,2013.EpidemiologyofAfricanswinefevervirus.VirusRes.173,191–197.)。ASFV为一大的有囊膜的双链DNA病毒，属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)成员(Dixon,L.K.,Chapman,D.A.,Netherton,C.L.,Upton,C.,2013.Africanswinefevervirusreplicationandgenomics.VirusRes.173,3–14.)。ASFV可引起感染家猪和欧洲野猪的出血热和高死亡率，而对非洲野猪，如疣猪(warthogs)和非洲灌丛野猪(bushpigs)则呈隐性感染(Denyer,M.S.,Wilkinson,P.J.,1998.AfricanSwineFever.In:EncyclopediaofImmunology.pp.54–56.)。ASFV还存在于非洲钝缘蜱，该蜱是ASFV的自然宿主。经历了上世纪60年代、70年代和80年代从非洲大陆到欧洲和美国的几段长距离传播之后，近30年以来，除了意大利的撒丁岛，ASF局限于非洲地区。直到2007年，该病爆发于格鲁吉亚(Rowlands,R.J.,Michaud,V.,Heath,L.,Hutchings,G.,Oura,C.,Vosloo,W.,Dwarka,R.,Onashvili,T.,Albina,E.,Dixon,L.K.,2008.Africanswinefevervirusisolate,Georgia,2007.Emerg.Infect.Dis.14,1870–1874.；Costard,S.,Mur,L.,Lubroth,J.,Sanchez-Vizcaino,J.M.,Pfeiffer,D.U.,2013.EpidemiologyofAfricanswinefevervirus.VirusRes.173,191–197.)，随后疫情迅速蔓延至整个高加索地区和俄罗斯联邦、白俄罗斯和乌克兰，最终于2014年传到了欧盟(Gogin,A.,Gerasimov,V.,Malogolovkin,A.,Kolbasov,D.,2013.AfricanswinefeverintheNorthCaucasusregionandtheRussianFederationinyears2007-2012.VirusRes.173,198–203.；OIE.2014.WorldAnimalHealthInformationDatabase(WAHID).http://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Diseaseinformation/Immsummary.；Sánchez-Vizcaíno,J.M.,Mur,L.,Gomez-Villamandos,J.C.,Carrasco,L.,2015.AnupdateontheepidemiologyandpathologyofAfricanswinefever.J.Comp.Pathol.152,9–21)。鉴于ASF传播的各种已知风险因素及中国最近经济和国际贸易的不断扩张，对于该病传入世界养猪第一大国中国的风险不容忽视。由于目前没有针对ASF的疫苗及有效的治疗手段，快速可靠的诊断对防控措施的及时实施，阻止该毁灭性疾病的蔓延是至关重要的。此外，考虑到与其它猪传染病如猪瘟(CSF)的临床症状相似以及非特异性临床表现出现的可能性，对ASFV的早期和准确的检测是快速决策的关键(Oura,C.A.,Edwards,L.,Batten,C.A.,2013.VirologicaldiagnosisofAfricanswinefever—comparativestudyofavailabletests.VirusRes.173,150–158.)。对于病毒学检测，OIE推荐的方法包括病毒分离、荧光抗体实验(FAT)、常规PCR和实时定量PCR(荧光定量PCR)(Agüero,M.,Fernández,J.,Romero,L.,SánchezMascaraque,C.,Arias,M.,Sánchez-Vizcaíno,J.M.,2003.HighlysensitivePCRassayforroutinediagnosisofAfricanswinefevervirusinclinicalsamples.J.Clin.Microbiol.41,4431–4434.；King,D.P.,Reid,S.M.,Hutchings,G.H.,Grierson,S.S.,Wilkinson,P.J.,Dixon,L.K.,Bastos,A.D.,Drew,T.W.,2003.DevelopmentofaTaqManPCRassaywithinternalamplificationcontrolforthedetectionofAfricanswinefevervirus.J.Virol.Methods107,53–61；Oura,C.A.L.,Arias,M.,2012.Africanswinefever.In:OIEBiologicalStandardsCommission(ed),OIEManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals,7thed.OfficeInternationaldesEpizooties,Paris,France,pp.1069–1082.；Oura,C.A.,Edwards,L.,Batten,C.A.,2013.VirologicaldiagnosisofAfricanswinefever—comparativestudyofavailabletests.VirusRes.173,150–158.；Sánchez-Vizcaíno,J.M.本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)的PCR引物，其特征在于，选自以下四对引物中的任意一对：引物1：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成；引物2：由SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的核苷酸序列组成；引物3：由SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的核苷酸序列组成；引物4：由SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列组成。
【技术特征摘要】
1.检测非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus)的PCR引物，其特征在于，选自以
下四对引物中的任意一对：
引物1：由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成；
引物2：由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列组成；
引物3：由SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列组成；
引物4：由SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的核苷酸序列组...
【专利技术属性】
技术研发人员：仇华吉，罗玉子，孙元，孟星宇，李素，李永锋，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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