乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒包括：乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成乙型流感病毒的检测这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1U/L，相对于传统的乙型流感病毒的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。

Hepatitis B virus chemiluminescence immune detection reagent kit and preparation method thereof

The invention discloses an influenza B virus chemiluminescence immunoassay kit and preparation method thereof, influenza B virus chemiluminescence immunoassay kit includes: chemiluminescent markers of hepatitis recombinant influenza virus protein package carboxylated magnetic particles were labeled and anti Human Immunoglobulin. The influenza B virus chemiluminescence immunoassay kit for detection tool by automatic chemiluminescence immunoassay analyzer, detection of influenza B virus this influenza B virus chemiluminescence immunoassay kit, after the experiment, the detection sensitivity of 1U/ L sensitivity with respect to the traditional detection methods of influenza B virus increased 10 times at least this, immunoassay kit for detection of influenza B virus chemical detection precision.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
流行性感冒病毒 (influenza virus)，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的 RNA 病毒。人流感病毒分为甲 (A)、乙 (B)、丙 (C) 三种类型，是流行性感冒的病原体。甲型流感病毒 ：感染哺乳动物(人类、猪、雪貂、马)以及鸟类。乙型流感病毒 ：只感染人类。它表面突起的只有一种蛋白质，较为简单。但蛋白质的顺序会有不同。乙型病毒爆发时也会引起地区流行，但是疾病的产生通常较甲型病毒温和。丙型流感病毒：只感染人类，并不会引起严重的疾病。乙型流感病毒是常见的流感流行病毒，其仅在人类之间转播，乙型流感通常有肌炎及胃肠道症状，在某些年份成为强势株。相比较甲型流感，乙型流感病毒更容易引起较严重的合并症。目前乙型流感病毒感染的检测主要有以下几种方法 ：一、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(ELISA) 被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96 孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12 批次、6 批次、8 批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；(2) 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；(3) 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；(4) 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；(5) 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；(6) 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10 个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10 个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。二、放射免疫分析法放射免疫分析方法放射性污染大、加样步骤繁琐、操作复杂、操作时间长、测定结果不稳定、试剂保存时间短、试剂盒操作自动化程度低、配套仪器价格昂贵等不足之处。三、基因诊断对许多 RNA 病毒来说 RT-PCR 诊断方法比传统的病毒分离和抗原诊断方法既快又灵敏。而且RT-PCR可以很容易的同时诊断多种病毒，另一些诊断方法如病毒分离和免疫荧光分析却不能。 但该方法也有不足之处，如 PCR 技术，DNA扩增的高校性导致了极微量的污染既可出现假阳性，因而使结果失真。此外病毒作为外原基因的入侵者，必须在阐明其全部或部分核苷酸序列时，才可以设计引物或探针，进行核酸分子杂交和PCR检测。从现有的乙型流感病毒的检测方法可见，EIA、病毒分离、RT-PCR诊断方法尽管都有一定的特异性和敏感性的优点，但在操作上需要专业技术人员、 专门的仪器设备和特定的条件及费时等缺点。吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比以上方法具有明细优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少，已经成为乙型流感病毒诊断新的发展方向。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。一种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，包括：乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。在一个实施例中，所述乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述乙型流感病毒重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。在一个实施例中，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述抗人免疫球蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。在一个实施例中，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。在一个实施例中，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。在一个实施例中，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。在一个实施例中，所述A液为H2O2溶液，所述B液为NaOH溶液。在一个实施例中，还包括乙型流感病毒定标品。在一个实施例中，所述乙型流感病毒定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的乙型流感病毒的溶液。一种上述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入乙型流感病毒重组蛋白，室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒；以及取抗人免疫球蛋白，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应1h~2h后除杂，得到抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成乙型流感病毒的检测这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1U/L，相对于传统的乙型流感病毒的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。附图说明图1为一实施方式的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒的制备方法的流程图；图2为实施例3得到的乙型流感病毒标准曲线图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。一实施方式的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，包括：乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。优选的，乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，乙型流感病毒重组蛋白与羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。优选的，抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，抗人免疫球蛋白与化学发光标记物的比例为50：1~10。优选的，羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。化学发光标记物可以为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。其中，化学发光标记物优选为吖啶酯。在其他的实施例中，上述乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒还包括化学发光底物液。化学发光底物液包括A液和B液。A液可以为H2O2溶液，B液可以为NaOH溶液。本实施例中，A液为浓度为0.1mol/L的H2O2溶液，B液为浓度为0.25mol/L的NaOH溶液。在其他的实施例中，上述乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒还包括乙型流感病毒定标品。乙型流感病毒定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U\本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。

【技术特征摘要】
1.一种乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。2.根据权利要求1所述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述乙型流感病毒重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述乙型流感病毒重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。3.根据权利要求1所述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述乙型流感病毒重组蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。4.根据权利要求1所述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。5.根据权利要求1所述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。6.根据权利要求1所述的乙型流感病毒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。7.根据权利要求6所述的乙型流...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓雯，夏福臻，祝亮，王刚，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44