一种甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原的联检试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种甲型流感病毒抗原和乙型流感病毒抗原的联检试纸，包括样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜以及吸水纸，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区、包被有乙型流感病毒抗体的检测区和包被有羊抗兔抗体的控制区，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的兔IgG抗体，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-甲/乙型流感病毒抗体。本实用新型专利技术在双抗体夹心检测体系中添加了生物素-亲和素微信号放大系统，扩大了目标抗体的信号，增加检测灵敏度，避免因信号太弱而出现假阴或者漏检，同时还可同时对甲型和乙型流感病毒抗原进行联检，节省检测时间、样本和成本。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于医学检验领域，尤其涉及一种甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸。
技术介绍
流行性感冒，通常称为“流感”，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有很强的传染性，主要通过咳嗽和打喷嚏传播，一般春季和冬季爆发。分为A型(甲型)流感病毒、B型(こ型)流感病毒和C型(丙型)流感病毒。甲型流感病毒具有极强的变异性，乙型病毒次之，而丙型病毒则非常稳定，故甲型病毒和こ型病毒的检测尤为重要。根据统计，全球毎年的流感病例为6-12亿，其中重症流感为300-500万例，死亡 25-50万人，重症流感的病死率可达8% -10%。目前美国毎年流感导致的死亡人数超过车祸和艾滋病造成的死亡人数，在我国和发展中国家已成为严重危害人类健康的头号大故。我国是流感的高发区，流感的流行或局部暴发基本上毎年都有，毎年有I亿多人遭受流感的困扰，到医院就医者超过50万人。现阶段检测流感病毒感染的方法主要包括病毒培养法、RT-PCR法以及胶体金免疫层析法。病毒培养是病毒检测的金标准，但这种检测方法周期很长，一般要3 7天的时间，灵敏度不高；RT-PCR能够4-8小时内对样本实现检测，且灵敏度和特异性很高，但是并不适于在机场、ロ岸、火车站、医院等人口密度大、人流量大、不易让人群长时间聚集的公共场所；胶体金免疫层析法由于不需要辅助的设备，方便的储运及操作简便非常适合在基层场所使用，但现阶段灵敏度不高，容易造成漏检，尚不能够区分病毒感染亚型。中国专利CN200910087632. 5公开了ー种属于病原体基因快速诊断领域的检测甲型HlNl流感病毒的专用引物和包括该引物的检测甲型HlNl流感病毒的试剂盒以及该引物所对应的靶序列。本技术的专用引物所对应的靶序列，该试剂盒利用基因反转录和等温扩增技术原理，对甲型HlNl病毒核酸进行快速检测，检测结果可肉眼判定，也可利用电泳进行分析。但是该方法耗时长，费用大，不利于大面积推广和民用化。中国专利CN200910085475. 4公开了ー种流感病毒rRT_PCR检测引物和探针及检测流感病毒的方法，包括甲型流感病毒特异性引物和探针、两组新甲型HlNl流感病毒Hl特异性引物和探针、新甲型流感病毒特异性引物和探针等，4种共12条寡核苷酸引物和探针序列，同时公开了待检样本处理、rRT-PCR反应体系及反应条件、结果分析。该方法的不足也是由于费用昂贵、需要专业的仪器和操作人员需要经过专业培训。故该方法也不适用于普及和民用化。同样的，专利号为CN200810022489. 7的专利公布了一种借助液相芯片检测流感和H5N1亚型禽流感病毒的方法、申请号为CN201110223913. 6的专利公布了甲型/こ型流感病毒核酸双重荧光PCR检测试剂盒、申请号为CN201010171355.9的专利公布了人甲、こ型流感及新甲型HlNl流感病毒一管多检方法及试剂盒、申请号为201110149333. 7公布了双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及应用，这些方法都存在费用高、需要专业仪器、检测周期长的问题，不利于流感检测在家庭、在基层及更广泛人群中推广使用。申请号为CN200710040792的技术专利多联检测试剂盒公开了ー种多项联检的试剂盒，但是该试剂盒是有多条检测条组成的，虽然可以同步联检，但是没有达到最大降低一次性耗材消耗，不够环保。申请号为CN200910040975公布了一种用于检测甲型流感病毒及甲型HlNl流感病毒的核酸纳米金生物传感器，是通过玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针以及在硝酸纤维素膜上固定两种寡核苷酸探针来检测目标物。但是因为流感会有甲型和こ型之分，该技术就不能实现同时检测的目的，而且，检测时间基本需要在半个小时以上。
技术实现思路
本技术的目的在于解决现有技术中存在的流感病毒检测费用昂贵、检测周期 长、用纳米金灵敏度稍低、以及不能同时检测甲型和こ型流感病毒的缺陷，而提供一种新的甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸。为实现上述目的，本技术采取了以下技术方案一种甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸，所述试纸由样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的兔IgG抗体，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-甲型或こ型流感病毒抗体；所述检测区包括包被有甲型流感病毒抗体的检测线和包被有こ型流感病毒抗体的检测线，所述质控区包被有羊抗兔抗体。优选地，所述包被有甲型流感病毒抗体的检测线和包被有こ型流感病毒抗体的检测线之间的距离为2-5mm。更优选地，所述包被有甲型流感病毒抗体的检测线和包被有こ型流感病毒抗体的检测线之间的距离为3. 5mm。为了解决信号扩大不足和不能同时检测两种分型的问题，本技术基于固相免疫层析原理，采用功能性彩色微球技术(胶体金颗粒标记技术)、微信号放大技术(亲和素-生物素体系和双抗体夹心反应体系)及联检技术检测人体分泌物中的流感病毒抗原。若样品中含有甲型流感病毒抗原或者是こ型流感病毒抗原，经玻璃纤维膜上的微信号级联系统将信号放大，使甲型/こ型流感病毒抗原与胶体金颗粒标记物结合，形成复合物，并扩散到硝酸纤维素膜上进ー步层析，当遇到包被在硝酸纤维素膜上检测区的Tl线或者T2线(分别为甲型或こ型流感病毒抗体包被线)处的配对抗体时，复合物则又和包被抗体結合，被捕获在包被处，当被捕获的复合物达到一定数量吋，则形成肉眼可见的T线，说明样品中含有甲型或こ型流感病毒抗体，若不出现，说明样品为阴性或含量低于试纸的最低检测限。控制区(C线)作为试纸的质控标准，阳性和阴性样品检测时均会出现。与现有技术相比，本技术具有以下有益效果(I)本技术在现有检测试纸的基础上，添加了生物素-亲和素微信号级联放大系统，因而，在检测甲型/こ型流感病毒抗原的过程中，扩大了目标抗体的信号，增加检测灵敏度，避免因信号太弱而出现假阴或者漏检；同时，通过调整不同的制备エ艺參数，实现在同一条试纸条上两种分型的同时检测。(2)本技术的试纸条具有操作安全(无放射物污染)、简便(简单操作ー步完成)、适合单人/份检测(放免、酶免不适合单人/份或少量样品检测)和快速(15分钟左右即可有结果)等优点，可实现对甲型/こ型流感病毒抗原现场和家庭自检；弥补现阶段层析试剂盒灵敏度不高及不能实现分型的缺陷，将能够最大限度地降低人群聚集感染的风险、在疫情现场减低疾病造成的危害；(3)本技术的试纸可以实现在一条纸条上同时检测甲型、こ型两种流感病毒，缩短了检测周期，減少因为单ー检测某种分型而漏检的现象，并节约了一次性耗材。附图说明图I为本技术的甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸的结构示意图；附图标记1.样品垫；2.玻璃纤维膜；3.硝酸纤维素膜；4.吸水纸；5.底板；6.甲型流感病毒检测区；7.こ型流感病毒检测区；8.控制区。具体实施方式以下结合附图和具体实施例来详细说明本技术。实施例I本技术甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸如图I所示，为本技术所述的ー种甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸。包括样品垫I、与所述样品垫I 一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲型流感病毒抗原和こ型流感病毒抗原的联检试纸，所述试纸由样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，其特征在于，所述胶体金颗粒标记物包括微信号放大系统和胶体金标记的兔IgG抗体，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素-甲型或こ型流感病毒抗体；所述检测区包括包被有甲型流感病毒抗体的检测线和包被有こ型流感病毒抗体的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：王继华，张健，郭诗静，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：