本发明专利技术公开了一种检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸条及其制备方法，该试纸条由样品垫、含有彩色胶乳颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区和包被有羊抗兔抗体的控制区，所述彩色胶乳颗粒标记物包括微信号放大系统和彩色胶乳标记兔IgG抗体，所述微信号放大系统为彩色胶乳颗粒-亲和素-生物素-甲型流感病毒抗体。本发明专利技术在双抗体夹心检测体系中，添加了生物素-亲和素微信号放大系统，扩大了目标抗体的信号，增加检测灵敏度，避免因信号太弱而出现假阴或者漏检。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检验领域，尤其涉及。
技术介绍
根据统计，全球每年的流感病例为6亿-12亿，其中重症流感为300万-500万例， 死亡25万人-50万人，重症流感的病死率可达8% -10%。目前美国每年流感导致的死亡人数超过车祸和艾滋病造成的死亡人数，在我国和发展中国家已成为严重危害人类健康的头号大敌。我国是流感的高发区，流感的流行或局部暴发基本上每年都有，每年有1亿多人遭受流感的困扰，到医院就医者超过50万人。流行性感冒，通常称为“流感”，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有很强的传染性，主要通过咳嗽和打喷嚏传播，一般春季和冬季爆发。分为A型(甲型)流感病毒、B型(乙型)流感病毒和C型(丙型)流感病毒。甲型流感病毒具有极强的变异性，乙型病毒次之，而丙型病毒则非常稳定。现阶段检测流感病毒感染的方法主要包括病毒培养法、RT-PCR法以及胶体金免疫层析法。病毒培养是病毒检测的金标准，但这种检测方法周期很长，一般要3 7天的时间，灵敏度不高；RT-PCR能够4-8小时内对样本实现检测，且灵敏度和特异性很高，但是并不适于在机场、口岸、火车站、医院等人口密度大、人流量大、不易让人群长时间聚集的公共场所；胶体金免疫层析法由于不需要辅助的设备，方便的储运及操作简便非常适合在基层场所使用，但现阶段灵敏度不高，容易造成漏检，尚不能够区分病毒感染亚型。最近出现的一种新的彩色胶乳检测技术，灵敏度比胶体金要高10-100倍，并且可以通过调成不同的颜色，可以进一步推广到实现不同项目的同时检测。中国专利CN200910087632. 5公开了一种属于病原体基因快速诊断领域的检测甲型Hmi流感病毒的专用引物和包括该引物的检测甲型Hmi流感病毒的试剂盒以及该引物所对应的靶序列。本专利技术的专用引物所对应的靶序列，该试剂盒利用基因反转录和等温扩增技术原理，对甲型Hmi病毒核酸进行快速检测，检测结果可肉眼判定，也可利用电泳进行分析。但是该方法耗时长，费用大，不利于大面积推广和民用化。中国专利CN20091008M75. 4公开了一种流感病毒rRT_PCR检测引物和探针及检测流感病毒的方法，包括甲型流感病毒特异性引物和探针、两组新甲型Hmi流感病毒Hl特异性引物和探针、新甲型流感病毒特异性引物和探针等，4种共12条寡核苷酸引物和探针序列，同时公开了待检样本处理、rRT-PCR反应体系及反应条件、结果分析。该方法的不足也是由于费用昂贵、需要专业的仪器和操作人员需要经过专业培训。故该方法也不适用于普及和民用化。申请号为CN200910040975公布了一种用于检测甲型流感病毒及甲型Hmi流感病毒的核酸纳米金生物传感器，是通过玻璃纤维上涂有纳米金标记寡核苷酸探针以及在硝酸纤维素膜上固定两种寡核苷酸探针来检测目标物。但是检测时间基本需要在半个小时以上。同样的，专利号为CN20081002M89. 7的专利公布了一种借助液相芯片检测流感和H5m亚型禽流感病毒的方法、申请号为CN201110223913. 6的专利公布了甲型/乙型流感病毒核酸双重荧光PCR检测试剂盒、申请号为CN201010171355.9的专利公布了人甲、乙型流感及新甲型Hmi流感病毒一管多检方法及试剂盒、申请号为201110149333. 7公布了双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒及应用，这些方法都存在费用高、需要专业仪器、检测周期长的问题，不利于流感检测在家庭、在基层及更广泛人群中推广使用。如上所述，基于彩色胶乳检测技术，再添加亲和素-生物素信号扩大系统，结合抗体制备技术，在克服胶体金灵敏度不足的同时也可以实现甲型流感病毒抗体的检测。该试剂条兼备简便、快速、准确的特点，适合基层单位初筛和家庭使用，弥补现阶段层析试剂盒灵敏度不高及不能实现分型的缺陷，将能够最大限度地降低人群聚集感染的风险、在疫情现场减低疾病造成的危害。联检的设计可以节省每一次检测的一次性耗材。这些设计特点符合国家医疗保障制度在基层的推广的政策和环保的倡议。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中存在的流感病毒检测费用昂贵、检测周期长、 用纳米胶体金灵敏度稍低的缺陷，而提供一种新的检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸^^ O为实现上述目的，本专利技术采取了以下技术方案一种检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸条，其特征在于，所述试纸条由样品垫、含有彩色胶乳颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区和包被有羊抗兔抗体的控制区，所述彩色胶乳颗粒标记物包括微信号放大系统和彩色胶乳标记兔IgG抗体，所述微信号放大系统为彩色胶乳颗粒-亲和素-生物素-甲型流感病毒抗体。所述的检测分泌物中甲型流感病毒抗原的试纸条，其特征在于平行包被了甲型流感病毒抗体，可以检测甲型流感病毒抗原。优选地，所述彩色胶乳颗粒-亲和素-生物素-甲型流感病毒抗体复合物的用量为32. 5-60 μ g/cm2 ；所述检测区上包被的甲型流感病毒抗体用量为0. 144-0. 28 μ g/mm ；所述彩色胶乳标记兔IgG抗体的用量为20-40 μ g/cm2 ；所述羊抗兔抗体为羊抗兔IgG抗体，所述羊抗兔抗体的用量为0. 18-0. 44 μ g/mm。优选地，所述彩色胶乳颗粒-亲和素-生物素-甲型流感病毒抗体复合物的用量为55-60 μ g/cm2，所述检测区上包被的甲型流感病毒抗体用量为0. 20-0. 23 μ g/mm，所述彩色胶乳标记兔IgG抗体的用量为g/cm2，所述羊抗兔抗体的用量为0. 30-0. 36 μ g/ mmD本专利技术还提供了上述试纸条的制备方法，包括以下步骤(1)按常规方法制备甲型流感病毒抗体以及彩色胶乳标记兔IgG抗体；(2)制备微信号放大系统a、制备彩色胶乳标记亲和素将待标记亲和素预先在0. 001 0. 01mol/L的NaCl溶液中透析过夜，离心，调节彩色胶乳液的PH值至7 8，标记亲和素以形成彩色胶乳标记亲和素；b、按常规方法制备生物素化甲型流感病毒抗体，所述生物素与甲型流感病毒抗体的质量比为1:9;c、完成微信号放大系统将步骤a得到的彩色胶乳标记亲和素和步骤b得到的生物素化甲型流感病毒抗体混合，所述彩色胶乳标记亲和素与生物素化甲型流感病毒抗体的用量比例为1ml彩色胶乳标记亲和素溶液中加入100μ 1生物素化甲型流感病毒抗体，连接得到彩色胶乳-亲和素-生物素-甲流感病毒抗体，洗涤，即得微信号放大系统；(3)按稀释参数20cm2/ml 40cm2/ml，将步骤⑵的彩色胶乳-亲和素-生物素-甲型流感病毒抗体和彩色胶乳-兔IgG抗体喷洒到玻璃纤维膜上，干燥备用；(4)用包被缓冲液稀释甲型流感病毒抗体，使其浓度为0. 9mg/ml 1. %ig/ml，按膜液量0. 16 μ 1/mm 0. 2 μ 1/mm，将其细致均勻的喷到硝酸纤维素膜上，干燥备用；用包被缓冲液稀释羊抗兔抗体，使其浓度为1. Omg/ml 2. 0mg/ml,按膜液量 0. 18 μ 1/mm 0. 22 μ 1/mm，将其细致均勻的喷到硝酸纤维素膜上，干燥备用；(5)将样品垫、步骤( 的玻璃纤维膜、步骤(4)的硝酸纤维素膜、吸水纸按序粘贴于底板上，即得。优选地，所述步骤(3)中彩色本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王继华，张健，王雪霞，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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