本发明专利技术公开了一种甲型H1N1流感血凝素(HA)抗原，还公开了该抗原在制备甲型H1N1流感血凝素抗体检测试剂中的用途。本发明专利技术采用生物信息学技术对现有甲型H1N1流感HA序列进行分析，筛选出5个抗原区段进行克隆表达，并通过甲型H1N1流感疫苗者血清检测上述HA抗原的反应情况，建立间接酶联免疫法检测甲型H1N1流感血凝素抗体，并进一步对抗体类型进行鉴定，本发明专利技术不接触甲型H1N1流感病毒，安全性强，可用于人群甲型H1N1流感流行病学和疫苗保护效果的验证。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及甲型Hmi流感血凝素抗原，还涉及该抗原在制备检测甲型Hmi流感血凝素抗体检测中的用途。
技术介绍
2009年爆发的新型甲型Hmi流感引起了全球关注(Dawood FS, Jain S，Finelli L, et al. Emergenceof a novel swine-origin inf1 uenza A (HlNl) virus in humans. N Engl J Med 2009 ；360 =2605-15.)，甲型H1N1/2009流感病毒属于正黏病毒科，含有8个单股负链RNA片段，分别编码因PB2，PBl，PA, HA, NP, NA, NS和MP等蛋白。其中RNA片段4 (HA 基因)编码病毒重要的膜蛋白血凝素(HA)，研究显示，HA含有细胞受体结合位点、介导病毒和细胞融合，是宿主特异性的主要决定因素，同时，HA抗原能诱导感染机体产生保护性中和抗体，因此，HA抗体的检测在流感病毒的研究中具有重要作用(Itoh Y，Shinya K，KisoM, et al. In vitro and in vivo characterization of new swine-origin HlNl infl uenza viruses. Nature 2009 ；460 :1021-25.)。由于HA抗体具有重要的保护作用，在疾病的转归、疫苗保护效果的评价、既往感染的流行病学调查中具有重要作用，因此HA抗体的检测具有重要的意义。由于缺少新型甲型Hmi流感特异性的HA抗原，目前，对HA抗体的检测主要采用的是血凝抑制实验、微孔中和测试等(Garten RJ, Davis CT, Russell CA, Shu B. Antigenic and Genetic Characteristics of Swine-Origin 2009 A(HlNl) Influenza VirusesCirculating in Humans Science. 2009 ；325 (5937) :197-201.)血凝检测主要是根据流感病毒的HA抗原能引起红细胞发生凝集作用这一原理进行的，而加入HA的抗血清后，抗原和抗体发生特异性结合，病毒则失去对红细胞的凝集作用，即血凝抑制试验。由此可见，血凝抑制检测无法区分IgG、IgM、IgA抗体，因此血凝抑制试验多用于对病毒的鉴定和疫苗保护效果的评价，在疾病的临床转归中意义不大。除此以外血凝试验和血凝抑制试验均需要病毒的培养，由于甲型Hmi流感具有很强的传染性，因此上述试验均需要在具有一定生物安全等级的试验室中才能展开，限制其在血清流行病学调查的应用。新型甲型Hmi流感HA共有566个氨基酸筑成，其中1_17为信号肽，18-344编码 HAl亚基，346-566编码HA2亚基，第345的精氨酸在形成HA分子的过程中被水解掉。HA 分子在病毒囊膜上以同源三聚体的形式存在，HAl位于组成抗原的头部，具有与宿主细胞受体结合的特性，至少含有5个抗原结构域，其抗体具有中和活性，是疫苗研究和特异型别诊断研究的靶点。HA2的N末端参与病毒和细胞融合的过程，属于高保守区，不同亚型之间具有明显的交叉性，抗体中和效果不明显。HA含有4-7个糖基化位点，其中大部分位于HA1， HA糖基化对宿主的限制性和毒力强弱有密切关系。尽管糖基化能给HA的抗原性带来一定的变化，但该变化能导致不同型别HA抗体之间的交叉性，这意味着非糖基化的抗原具有更好的特异性，特别是近年的研究显示，大肠杆菌表达得HA复性后能够保持抗原的立体构3象，这些研究提示我们原核表达系统在特异性HA抗原筛选中具有一定的优势(Evaluation of hemagglutinin subtype 1 swine influenzaviruses from the United Statesl. Evaluation of hemagglutinin subtype 1 swine influenza virusesfrom the United States. Vet Microbiol. 2006 ；118(3-4) :212-22)。HA抗原具有极高的变异性，为了逃避宿主的免疫压力，HA通过点突变形成抗原漂移(antigenicdrift)，产生新的病毒株。新毒株除了能突破原有的宿主特异性，更重要的是使宿主针对先前流行株的抗体不能再中和新出现的毒株，造成新病毒株在人群中的大量传播。2009年发生的新型甲型Hmi流感病毒是北美猪流感、禽流感和欧亚猪流感的复合毒株。显著特点是在人群中的传播迅速，表现出对人体的高度适应性。采用血凝试验对此次型甲型Hmi流感HA抗原的特异性进行鉴定，用古典猪Hl病毒、曾经感染人的猪Hl病毒、2009 A(HlNl)病毒、季节性Hl和H3病毒免疫的雪貂抗血清该对18个墨西哥甲型Hmi流感分离株和38个美国流感分离株的抗原性进行鉴定。结果显示，不同地区发现的甲型Hmi流感病毒具有相同的抗原性，与古典猪Hl病毒、曾经感染人的猪Hl病毒的抗原性相近，但与季节型流感病毒的雪貂抗血清并不交叉(Miller Ε, Hoschler K， Hardelid P,Stanford Ε, Andrews N, Zambon Μ. Incidenceof 2009 pandemic inf1 uenza A HlNl infection in England :a cross-sectional serological study. Lancet 2010 ； S0140-6736 (09) 62126-7)。这些试验从血清学角度证明新型甲型Hmi-HA抗原具有一定的特异性，而特异性抗原区间的筛选和鉴定工作至今无人研究。对新型甲型Hmi流感HA的序列变异分析显示与2006、2007年美国俄亥俄州 A/swine/HlNl病毒相差35 37个氨基酸，与我国的2008年以及2007年报道的甲型流感病毒(HlNl)的血凝素(HA)的氨基酸序列分别为70% 77%和71% 90%。而我们得研究显示，与我国的浙江猪流感病毒学序列相比，HA抗原共共发生了 122处变异，并对这些变异引发的HA抗原性的改变进行了大量的预测。这些早期的对表位预测的生物信息学研究， 为我们从蛋白水平验证HA抗原的免疫学特性打下了良好的基础，也为我们筛选特异性的 HA抗原提供很好的技术支持。尽管甲型Hmi流感为新变异的病毒，但仍有少数人含有针对HA的交叉抗体，美国CDC的去年九月的血清流行病学研究显示，在1980年前出生的人群中有4%的人存在针对此次甲型Hmi流感HA交叉抗体，而英国学者采用疾病流行前的血清(2008年年底)进行的流行病学调查显示，大约有3%的15岁以下儿童和23%的成人及65岁以上老人具有交叉的HA抗体，这些流行病学的资料提示，在研制新的甲型Hmi流感抗体诊断试剂中，试剂的特异性要充分考虑选择人群中的HA抗体交叉的基础数据(Cross-reactiveantibody responses to the 2009 pandemic HlNl inf 1 uenza virus. N Engl J Med 2009 ；361 194本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．甲型Ｈ１Ｎ１流感ＨＡ抗原，其特征在于氨基酸序列分别为序列表中所示的５种序列：（１）序列表中序列１，（２）序列表中序列２，（３）序列表中序列３，（４）序列表中序列４，（５）序列表中序列５。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：修冰水，张贺秋，房涛，宋晓国，王国华，陈坤，冯晓燕，朱翠侠，何竞，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：11
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