本发明专利技术公开了一种利用TlSP检测羊泰勒虫病的间接ELISA方法，包括如下步骤：①包被；②封闭；③与一抗结合；④与二抗结合；⑤显色；⑥终止；⑦结果判定：样品的效价表示为：(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)，若效价小于0.20，为阴性；效价在0.20～0.30之间为可疑；效价大于0.30为阳性；本发明专利技术选取中国羊泰勒虫病的流行虫种-吕氏泰勒虫的TlSP基因，通过克隆表达，以纯化的TlSP蛋白作为诊断抗原，采用间接ELISA模式，研制出吕氏泰勒虫TlSP抗体检测试剂盒。该法操作简单，耗时短，成本低，高通量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及畜牧兽医领域，尤其涉及的是一种用于羊泰勒虫病检测的间接ELISA方法。
技术介绍
羊泰勒虫病(ovine Theileriosis)是由媒介蝶传播的由泰勒科泰勒属的原虫寄 生于绵羊和山羊巨曬细胞、淋巴细胞和红细胞内所引起的疾病的总称，属于一种蝶传性血液原虫病。在我国，已报道的羊泰勒虫病的病原有尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫。本病危害严重，可引起羔羊和外地引进羊大量死亡，使慢性发病的山羊和绵羊发育变缓，产肉量和产毛量显著下降，从而给养羊业造成重大经济损失。在临床上，泰勒虫病的诊断可根据临床症状如高热、贫血、体表淋巴结肿大和异嗜等，及流行病学资料如发病季节，本地区蜱的活动情况，动物在近期是否被蜱叮咬，发病地点，家畜是本地动物还是外地引入动物等做出初步的诊断。确诊泰勒虫病应查到病原，由于泰勒虫在进入畜体后主要以裂殖体和红细胞内虫体形式存在，病原检查只有查到一种阶段的虫体即可确诊，常用的方法有PCR、RT-PCR、RLB、LAMP等。由于虫体进入畜体之后，宿主即产生抗体，因此检测抗体的血清学诊断方法也用于泰勒虫病的诊断近年来,在牛的泰勒虫病研究中，国外以牛的环形泰勒虫的TaSP为目的蛋白建立了间接ELISA技术并相继进入田间试验2_6。在我国，简子健等以纯化的牛环形泰勒虫GST-Tamsl融合蛋白作为检测抗原，通过优化ELISA反应条件，建立检测牛环形泰勒虫血清特异性抗体的间接ELISA方法。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛环形泰勒虫病血清学诊断方法，为大规模地进行牛环形泰勒虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。在我国，2002年高玉龙以羊的泰勒虫虫体粗抗原建立了间接ELISA方法，但该法与绵羊巴贝斯虫有交叉反应，易造成假阳性结果和非特异反应。2006年，Miranda以泰勒虫热休克蛋白Hsp70类似物建立了羊泰勒虫的间接ELISA方法m。2010年，刘志杰等以尤氏泰勒虫TuiP重组蛋白为基础，建立了间接ELISA方法，该法仅用于由尤氏泰勒虫引起的羊泰勒虫病的检测，而对吕氏泰勒虫引起的羊泰勒虫病检测不到抗体。参考文献I.简子健，马素贞，黄家雨，孙其吉吉，沈炯玉，苗中秋，吕伟.牛环形泰勒虫GST-Tamsl融合蛋白间接ELISA检测方法的建立.新疆农业科学2011，48 (3) =578-583.2.Mohamed AM，Abdel-Rady A,Ahmed LS,El-Hosary A. Evaluat ion of indirectTaSP enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of tropical theileriosisin cattle(Bos indicus)and water buffaloes(Bubalus bubalis)in Egypt. VetParasitol. 2011Nov 12.3. Mohammad Al-Saeed AT，Omer LT, Abdo J，Habibi G，Sal ih DA, Seitzer.Epidemiological studies on tropical theileriosis (Theileria annulata infectionof cattle)in Kurdistan Region，Iraq. Parasitol Res. 2010Jan ；106(2) :403-7. Epub2009 Nov 13.4. Seitzer U，Beyer D，Kullmann B，Bakheit MA，Ahmed JS. Evaluation ofTheileria annulata recombinant immunodominant proteins for the development ofELISA. Transbound Emerg Dis. 2008Aug ;55 (5-6) :244-8.5. Seitzer U，Bakheit MA, Salih DE, Ali A，Haller D，Yin H，Schnittger L,Ahmed J. From molecule to diagnostic tool Theileria annulata surface proteinTaSP. Parasitol Res. 2007 Sep ；101 Suppl 2 S217-23.6. Miranda J，Bakheit MA,Liu I, Yin H，Mu Y，Guo S，Beyer D，01 iva A，AhmedJS,Seitzer U.Validation of the indirect TaSP enzyme-linked immunosorbent assayfor diagnosis of Theileria annulata infection in cattle. Parasitol Res. 2006 May ；98(6) :561-7. Epub 2006 Jan 20.7. Miranda J，Bakheit MA,Liu I, Yin H，Mu Y，Guo S，Beyer D，01 iva A，AhmedJS, Seitzer U. Development of a recombinant indirect ELISA for the diagnosis ofTheileria sp. (China)infection in small ruminants. Parasitol Res. 2006 May ；98 (6)561-7. Epub 2006 Jan 20.8. Gao YL, Yin H，Luo JX, Ouyang WQ, Bao HM, Guan GQ, Zhang QC, Lu WS, MaML. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis ofTheileria sp. infection in sheep.Parasitol Res. 2002 May ；88 (13 Suppl I) S8-10.9. Identification of Theileria uilenbergi immunodominant protein fordevelopment of an indirect ELISA for diagnosis of ovine theileriosis. Liu Z，Wang Z, Yin H，Luo J，Zhang B，Kullmann B，Abdo J，Salih D，Ahmed J, Seitzer U. Int JParasitol. 2010Apr ；40(5) :591-8. Epub 2009Nov 10.
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种用于羊泰勒虫病检测的间接ELISA方法。本专利技术的技术方案如下一种利用IlSP检测羊泰勒虫病的间接ELISA方法，其包括如下步骤①包被以包被缓冲液将表达产物HSP蛋白稀释至工作浓度，加入96孔酶标板，每孔50 u 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：殷宏，罗建勋，李有全，何海宁，刘志杰，杨吉飞，关贵全，陈泽，牛庆丽，马米玲，刘爱红，刘军龙，任巧云，鲁炳义，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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