【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制品，具体涉及一种抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。
技术介绍
1、猪δ冠状病毒(pdcov)是一种新型猪肠道冠状病毒，是肠源性、接触性的猪传染性疾病，主要引起5～21日龄哺乳仔猪精神抑郁、体温升高、水样腹泻、呕吐和严重脱水，感染后死亡率高达80％。pdcov与其它猪肠道病原共感染的现象也较为普遍，给我国养猪业造成了严重的经济损失。此外，近年来国内外有关研究表明，pdcov还可以感染犊牛和家禽，并且能够在家禽中引起腹泻症状；体外细胞实验也证实pdcov也可感染人源细胞，因此，pdcov是一种潜在的高风险新型冠状病毒病原体。
2、pdcov属于套式病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属。病毒粒子有囊膜，为单股正链rna病毒，电镜下观察发现病毒的直径大小约为80～160nm，具有典型的冠状突起，是目前发现最小的冠状病毒成员。pdcov编码4种结构蛋白：刺突蛋白(s)、包膜蛋白(e)、膜蛋白(m)和核衣壳蛋白(n)；冠状病毒n蛋白丰富的存在于宿主细胞内，并且在病毒复制及发病机理中起到重要作用，当冠状病毒感染宿主细胞时，n蛋白也大量产生，以调节宿主细胞周期、应激反应、免疫系统和信号转导等。m蛋白负责营养物质的跨膜运输、新生病毒出芽释放与病毒外包膜的形成。e蛋白较小，是负责病毒与包膜结合的蛋白。s蛋白在介导病毒入侵和感染中发挥重要作用，也是病毒诱导机体产生中和抗体的主要抗原；该蛋白由s1、s2两部分组成，含有多个b细胞抗原表位，推测s1 c末端的受体结构域(s1-ctd)包含主要rbd(受体结合区
3、抗体是由b细胞产生的免疫球蛋白，以可溶形式(血液或血浆)或膜结合形式(b细胞受体)存在，是体液免疫系统的主要组成部分，可提供针对入侵病原体(即病毒和细菌)的保护。自单克隆抗体被开发以来，由于其靶标特异性，被广泛研究并很快运用到医学研究、环境样品监测、生物安全等方面，这使得单克隆抗体成为生物化学、分子生物学和医学领域的强大工具。
4、由于pdcov是一种新发现的病毒，流行时间较短，在单克隆抗体开发方面的研究较少；因此，开发关于pdcov相关的单克隆抗体是必不可少的。目前，在利用pdcov单抗进行诊断的报道十分有限，并且大部分是基于pdcov n蛋白开发的单克隆抗体，如okda等使用制备的pdcov n蛋白单克隆抗体进行了细胞组织抗原检测和间接免疫荧光试验，并建立了pdcov的elisa检测方法；方谱县等以原核表达的pdcov n蛋白免疫balb/c小鼠，制备了pdcov n蛋白的特异性单克隆抗体，并初步应用于临床样品中pdcov抗原的免疫组织化学(ihc)检测；付嘉钰等人制备了pdcov n蛋白的单克隆抗体，并运用于免疫组化分析和流式细胞荧光分选技术检测。
5、冠状病毒结构蛋白中的纤突(spike，s)蛋白是糖基化修饰蛋白，其位于病毒颗粒囊膜表面，感染宿主时能够诱导产生中和性抗体，对pdco v的再次感染起到较好的预防作用，所以s蛋白是基因工程疫苗中研究的重要靶标，因此，筛选出针对s蛋白的单克隆抗体，为研究抵御病毒入侵的基因工程疫苗有重大意义。然而目前针对pdcov s蛋白的单克隆抗体的研究十分有限，缺乏与s蛋白发生良好结合性的抗pdcov s蛋白的单克隆抗体。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种杂交瘤细胞株，能够稳定分泌特异性结合能力强的抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体。
2、本专利技术提供了一种分泌抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.45718。
3、本专利技术提供了一种抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株分泌得到。
4、本专利技术提供了一种基于免疫检测技术的猪δ冠状病毒检测试剂盒，包含所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体。
5、优选的，所述免疫检测技术包括以下至少一种：elisa、westernblot、免疫荧光检测、免疫层析检测和免疫组织化学检测。
6、优选的，还包括pdcov s蛋白或截短s1-ctd蛋白；
7、所述截短s1-ctd蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
8、本专利技术提供了所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体在制备诊断猪δ冠状病毒感染的试剂盒中的应用。
9、本专利技术提供了所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体联合pdcov s蛋白或截短s1-ctd蛋白在制备诊断猪δ冠状病毒感染的试剂盒中的应用；所述截短s1-ctd蛋白的氨基酸序列如seq id no:1所示。
10、本专利技术提供了所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体在制备开发、筛选或验证猪δ冠状病毒感染临床靶标的试剂盒中的应用。
11、本专利技术提供了一种阻断猪δ冠状病毒感染的药物，包括所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体和药学上可接受的辅料。
12、本专利技术提供了所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体在制备预防和/或治疗猪δ冠状病毒感染的药物中的应用。
13、本专利技术提供的分泌抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.45718。本专利技术利用脾脏细胞与杂交瘤细胞融合技术，然后经过筛选，得到杂交瘤细胞株，具有稳定分泌单克隆抗体的能力，并且所述单克隆抗体特异性结合s抗原能力较强。western blot实验表明，与同批筛选实验中得到的其他杂交瘤细胞株相比，本专利技术保护的杂交瘤细胞株分泌的单抗在高度稀释后，仍然能与pdcov s蛋白或截短s1-ctd蛋白结合，并且具有较强的结合特性。可见，本专利技术提供的杂交瘤细胞株为进一步研究的s功能和开发pdcov的诊断试剂奠定了材料基础，为其作为pdcov临床诊断和治疗靶标的验证提供有力的工具。
14、本专利技术提供的抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体，由所述杂交瘤细胞株分泌得到。间接elisa方法进行特异性鉴定，证明该单克隆抗体能特异性识别pdcov s蛋白和/或截短s1-ctd蛋白，与pdcovn蛋白、猪流行性腹泻病毒(pedv)s蛋白不发生交叉反应；同时间接免疫荧光实验也证实该单克隆抗体可特异性识别pdcov天然s蛋白。本专利技术针对s蛋白制备出的单克隆抗体对检测该蛋白具有较高的特异性和灵敏度，且其单抗亚型为igg2b型，能用于elisa、westernblot、免疫荧光以及免疫组织化学检测，从而为该蛋白作为临床靶标验证及其功能的研究奠定了坚实的基础。
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1.一种分泌抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.45718。
2.一种抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌得到。
3.一种基于免疫检测技术的猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述免疫检测技术包括以下至少一种：ELISA、WesternBlot、免疫荧光检测、免疫层析检测和免疫组织化学检测。
5.根据权利要求3所述猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括PDCoV S蛋白或截短S1-CTD蛋白；
6.权利要求2所述抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体在制备诊断猪δ冠状病毒感染的试剂盒中的应用。
7.权利要求2所述抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体联合PDCoV S蛋白或截短S1-CTD蛋白在制备诊断猪δ冠状病毒感染的试剂盒中的应用；所述截短S1-CTD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
8.权利要
9.一种阻断猪δ冠状病毒感染的药物，其特征在于，包括权利要求2所述抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体和药学上可接受的辅料。
10.权利要求2所述抗猪δ冠状病毒S蛋白单克隆抗体在制备预防和/或治疗猪δ冠状病毒感染的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种分泌抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，保藏编号为cgmcc no.45718。
2.一种抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌得到。
3.一种基于免疫检测技术的猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述抗猪δ冠状病毒s蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述免疫检测技术包括以下至少一种：elisa、westernblot、免疫荧光检测、免疫层析检测和免疫组织化学检测。
5.根据权利要求3所述猪δ冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，还包括pdcov s蛋白或截短s1-ctd蛋白；
6.权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘新生，张莉萍，于瑞明，尚再卓，潘丽，张中旺，王永录，郭慧琛，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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