【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，具体为一种识别牛结节性皮肤病病毒和山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性及构象型抗原表位及其应用。
技术介绍
1、牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,lsd)是由牛结节性皮肤病病毒(lumpyskin disease virus,lsdv)感染后引起的一种急性、亚急性接触性的传染病。lsdv主要引起牛的发热、丘疹或皮肤结节，如头、颈、肩和乳房等处，严重时呈现脓疱状损伤和组织坏死性结痂。牛结节性皮肤病(lsd)是我国近年来新发的一种重要境外输入性动物疫病，对养牛业造成了重大的经济损失，严重影响了我国养牛产业的健康发展。lsd于1929年首次被发现于赞比亚共和国，随后该病迅速向中东、东欧和中亚等地区蔓延扩散。然而，由于缺少针对该疫病有效的治疗方法和特异性疫苗，自2019年以来，lsd在全国14个省、市和自治区都有确诊发生，并呈现逐渐蔓延的趋势，防控形势日益严峻。
2、lsdv与牛痘病毒(cowpox virus，cpxv)差异很大，而与绵羊痘病毒(sheep poxvirus，sppv)和山羊痘病毒(goat pox virus，gtpv)相似，同属于羊痘病毒属(capv)。目前，我们对痘病毒基因组的理解大部分来自对痘苗病毒(vaccinia virus,vacv)的相关研究，特异性针对gtpv和lsdv病毒基因组功能性的研究极其匮乏。gtpv和lsdv orf123基因编码一个196aa的蛋白，是lsdv和gtpv重要的结构蛋白，具体功能尚未有明确的报道。因此，深入阐述l
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种识别牛结节性皮肤病病毒和山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性及构象型抗原表位及其应用，解决了
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为pyflkn。
4、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位的关键性氨基酸位点，该线性抗原表位的关键性氨基酸位点为85p、86y和87f。
5、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位，该构象型抗原表位序列为pyflkn。
6、一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位的关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位的关键性氨基酸位点为87f。
7、一种识别山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性表位，该线性表位序列为pyflkn。
8、一种识别山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位的关键性氨基酸位点，该线性抗原表位的关键性氨基酸位点为85p、86y、87f和88l。
9、一种识别山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位，该构象表位序列为pyflkn；
10、一种识别山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位的关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位的关键性氨基酸位点为86y、87f和88l。
11、一种识别牛结节性皮肤病病毒和山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性及构象型抗原表位在兽医临床诊断试剂研发、制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
12、抗原决定簇(antigenic determinant)是指抗原分子能够与抗体发生特异性结合的位点，能与其相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的结构，具有一定组成和结构的特殊化学基团。结构已经确定的抗原决定簇称为抗原表位(epitope)，可分为线性表位(liner epitope)和构象型表位(conformational epitope)。
13、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
14、1、本专利技术中，针对lsdv orf123杂交瘤1g1-1g12细胞株单克隆抗体确定其b细胞线性及构象型抗原表位为85pyflkn90。该表位在lsdv和gtpv中的保守。采取截短、缺失及回补等措施，确定了lsdv和gtpv orf29蛋白b细胞的连续性的线性及构象型抗原表位。
15、2、本专利技术利用采用定点突变技术将鉴定出的抗原表位(85pyflkn90)突变为对蛋白质结构影响较小的丙氨酸(alanine,a)，确定线性和构象型抗原表位的关键性氨基酸位点。蛋白免疫印迹实验确定了85p、86y和87f为lsdv orf29蛋白线性抗原表位的关键性氨基酸位点；利用间接免疫荧光实验确定87f为lsdv orf29蛋白构象型抗原表位的关键性氨基酸位点。利用蛋白免疫印迹实验确定了85p、86y、87f和88l为gtpv orf29蛋白线性抗原表位的关键性氨基酸位点。利用间接免疫荧光实验确定86y、87f和88l为gtpv orf29蛋白构象型抗原表位的关键性氨基酸位点。利用红色荧光标记的lsdv毒株(rfp-lsdv)和绿色荧光标记的lsdv毒株(egfp-lsdv)证明该orf123单克隆抗体具有中和病毒活性，发挥中和作用。
16、3、本专利技术鉴定得到一种lsdv和gtpv orf123蛋白的b细胞连续性线性和构象型表位。该表位在羊痘病毒属中的gtpv和lsdv具有保守性，丰富了orf123蛋白的免疫学和结构生物学功能，为后续研究羊痘病毒属相关蛋白的抗原特性，免疫原特性等提供了参考。针对lsdv orf29蛋白的杂交瘤细胞株(1g1-1g12)分泌产生的单克隆抗体具有中和活性，可以应用于兽医临床诊断、抗病毒药物及抗原表位疫苗的研发等。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为PYFLKN。
2.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性抗原表位的关键性氨基酸位点，该线性抗原表位的关键性氨基酸位点为85P、86Y和87F。
3.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF123蛋白的B细胞连续性构象型抗原表位，该构象型抗原表位序列为PYFLKN。
4.一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF123蛋白的B细胞连续性构象型抗原表位的关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位的关键性氨基酸位点为87F。
5.一种识别山羊痘病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为PYFLKN。
6.一种识别山羊痘病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性抗原表位的关键性氨基酸位点，该线性抗原表位的关键性氨基酸位点为85P、86Y、87F和88L。
7.一种识别山羊痘病毒ORF123蛋白的B细胞连续性构象型抗原表位，该构象表位序列为PYFLKN。
8.一种识别山羊痘病毒ORF123蛋白的
9.一种识别牛结节性皮肤病病毒和山羊痘病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性及构象型抗原表位在研制兽医临床检测试剂盒研发、制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位，该线性抗原表位序列为pyflkn。
2.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位的关键性氨基酸位点，该线性抗原表位的关键性氨基酸位点为85p、86y和87f。
3.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位，该构象型抗原表位序列为pyflkn。
4.一种识别牛结节性皮肤病病毒orf123蛋白的b细胞连续性构象型抗原表位的关键性氨基酸位点，该构象型抗原表位的关键性氨基酸位点为87f。
5.一种识别山羊痘病毒orf123蛋白的b细胞连续性线性抗原表位，该线性抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：任善会，孙跃峰，殷相平，陈豪泰，王芳萍，王相伟，高小龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。