【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于功能蛋白，具体涉及多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂及其制备方法和在制备肠炎药物中的应用。
技术介绍
1、炎症性肠病(inflammatorybowel disease，ibd)是指一系列发生于肠道的慢性炎症性疾病，其发病率在全球范围内人群中呈上升趋势。研究表明，患ibd的病人其患结直肠癌的风险比正常人群高很多倍。动物慢性肠炎是一种临床中常见的肠道疾病，临床表现为腹泻，严重的会有便血、脱水以及体重明显下降等症状。其炎症特点是发作和缓解反复进行，并引起粘膜溃疡。临床治疗ibd的目标主要是缓解临床症状和防止疾病复发。目前，尚无有效的治疗方法可以完全治愈ibd。抗炎类药物5-氨基水杨酸和糖皮质激素等是ibd的一线治疗药物，效果均不理想，且有一定的副作用且会产生耐药性。基于单克隆抗体的生物疗法，其费用高昂，同时，为了达到疗效而采用的长时间以及高剂量的用药，也容易引发全身的并发症。此外，约有三分之二的患者仍然对常规疗法和生物疗法无反应，需要进一步手术治疗。因此，目前迫切需要开发高效安全的针对ibd的新型疫苗，创制安全、高效的副作用小的生物制剂势在必行。生物制剂免疫动物可诱导全面而持久的免疫反应，是首选替代品。
2、研究报道，人群中的寄生虫感染率下降与变态反应和自身免疫性疾病的发病率增加相关。此外，人类感染某些寄生虫可以保护人体免受炎症性疾病的侵袭。有研究已经证实感染蠕虫后炎症性肠病有所减轻，比如旋毛虫、猪鞭虫等感染可以减轻炎症性肠病的炎症程度，但活蠕虫治疗具有一定风险。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，通过亚单位疫苗形式免疫动物，能够有效缓解小鼠dss模型的肠道炎症。
2、本专利技术提供了一种多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，氨基酸序列如seq id no：1所示。
3、本专利技术提供了一种所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因，核苷酸序列如seq id no：2所示。
4、本专利技术提供了一种所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
5、构建含多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因的重组载体；
6、将所述重组载体转化至宿主菌中，得到重组菌株；
7、将所述重组菌株进行培养和诱导表达，分离菌体并破碎，收集蛋白。
8、优选的，含多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因的重组载体的构建方法，包括以下步骤：
9、扩增多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因，将扩增产物克隆至骨架载体中，筛选，得到重组载体。
10、优选的，扩增多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因用引物包括核苷酸序列seq id no：3所示的正向引物和核苷酸序列seq id no：4所示的反向引物；
11、扩增多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因的模板为多房棘球蚴的cdna。
12、优选的，所述骨架载体包括pcold i；
13、所述扩增产物在骨架载体的插入位置为bamhⅰ/hindiii。
14、优选的于，所述宿主菌为大肠杆菌bl21(de3)感受态。
15、优选的，所述培养的方法包括将重组菌株接种至含有100μg/mlamp的lb培养基中培养，培养条件为220rpm/min在37℃震荡培养2～3h；
16、所述诱导表达为向培养液中添加终浓度0.4mm的iptg。
17、本专利技术提供了一种防治肠道炎症的亚单位疫苗，包括佐剂和所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂或所述制备方法制备的多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂。
18、本专利技术提供了一种所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂或所述制备方法制备的多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防肠炎的药物或亚单位疫苗中的应用。
19、优选的，所述亚单位疫苗包括以下至少一种效用：
20、有效提高肠炎患者结肠长度；
21、有效减轻组织损伤；
22、缓解肠炎炎症程度。
23、本专利技术提供了一种多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，氨基酸序列如seq id no：1所示。采用原核表达系统重组表达得到多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，以亚单位疫苗的形式免疫炎症动物模型后，免疫组能够有效改善因造模造成的体重下降的问题同时提高精神，减轻稀便，大便成形减少便血现象；同时免疫组的疾病活性评分有所改善；同时免疫组还能有效改善造模组结肠长度缩短的问题；同时h&e染色结果表明，免疫组能够减轻肠炎炎症，保持肠隐窝结构完整，减少炎性细胞浸润以及降低病理组织评分，减轻组织损伤。可见，所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂能够一定程度环境肠炎炎症程度，是一种有潜力的预防和/或治疗肠炎的生物活性药物。
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1.一种多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.一种权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，含多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因的重组载体的构建方法，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，扩增多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因用引物包括核苷酸序列SEQ ID NO：3所示的正向引物和核苷酸序列SEQ ID NO：4所示的反向引物；
6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述骨架载体包括pCold I；
7.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态；
8.一种防治肠道炎症的亚单位疫苗，其特征在于，包括佐剂和权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂或权利要求4～8中任意
9.一种权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂或权利要求4～8中任意一项所述制备方法制备的多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防和/或治疗肠炎的药物或亚单位疫苗中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述药物或亚单位疫苗包括以下至少一种效用：
...【技术特征摘要】
1.一种多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂，其特征在于，氨基酸序列如seq id no：1所示。
2.一种权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如seq id no：2所示。
3.一种权利要求1所述多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，含多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因的重组载体的构建方法，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，扩增多房棘球蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂的编码基因用引物包括核苷酸序列seq id no：3所示的正向引物和核苷酸序列seq id no：4所示的反向引物；
【专利技术属性】
技术研发人员：王帅，郭爱疆，李晓璐，时志琪，王玉桂，邹扬，丁莹莹，刘怡慧，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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