【技术实现步骤摘要】
本申请涉及基因工程，具体涉及一种高活性重组人纤连蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
1、纤连蛋白(fibronectin，fn)是一种多功能糖蛋白，在血浆中含量丰富，广泛分布于细胞外基质中。纤连蛋白调节多种细胞的粘附、扩散、迁移、增殖、分化，从而在胚胎发育、组织修复中发挥重要作用。纤连蛋白形成细胞运动及定位的基质，介导成纤维细胞、巨噬细胞等参与损伤修复，因此，纤连蛋白在医学、美容、护肤领域有广泛的应用前景。虽然动物组织、血液中含有纤连蛋白，但是含量极为有限，因此，组织来源的纤连蛋白存在产量低，成本高，产品纯度低的缺点。
2、目前，国内研究使用的fn多购买于国外，或者从人体或动物血液和组织中提取的天然纤连蛋白，但这些方法获得的纤连蛋白数量有限且成本昂贵。重组dna技术通过构建线路蛋白基因的表达载体，在原核或者真核生物中表达、制备高纯度的纤连蛋白。但是，如何筛选纤连蛋白的活性结构域进行重构，获得高活性、高稳定性的纤连蛋白突变体是制约纤连蛋白应用的关键技术之一。此外，重组蛋白异源表达时，往往表达量低，特定蛋白可否在大肠杆菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞、植物表达系统中按需要表达、是否具有活性都是无法预知的，这也是制约纤连蛋白应用的另一关键技术。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中人工提取纤连蛋白量少并且生物活性低的技术缺陷，本申请经过深入研究，选取特定的人纤连蛋白功能性片段，利用毕赤酵母表达系统，表达密码子优化的重组人纤连蛋白，为重组人纤连蛋白在食品、化妆品、保健品或药械领域中
2、为实现以上目的，本申请提供以下技术方案：
3、本申请提供一种高活性的重组人纤连蛋白，所述人纤连蛋白的氨基酸序列如seqid no.1所示。
4、本申请还提供一种编码所述人纤连蛋白的核苷酸。
5、进一步的，所述核苷酸序列如seq id no.3所示。
6、本申请还提供一种重组人纤连蛋白的重组质粒，所述质粒包含所述的重组人纤连蛋白的氨基酸序列或所述的核苷酸序列。
7、本申请还提供一种表达重组人纤连蛋白的宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求4所述的重组质粒。
8、进一步的，所述宿主细胞为毕赤酵母。
9、本申请还提供一种制备所述重组人纤连蛋白的方法，包括以下步骤：
10、(1)在宿主细胞中表达所述的重组人纤连蛋白，得发酵液；
11、(2)离心所得发酵液收集菌体，用裂解液重悬菌体，得菌悬液；
12、(3)破碎所得菌悬液，0℃～4℃条件下离心收集上清；
13、(4)过滤收集的上清，得重组人纤连蛋白。
14、本申请还提供将所述的重组人纤连蛋白在制备美容组合物或药物中的应用，所述美容组合物或药物用于促进细胞黏附、促进细胞增殖和/或促进伤口愈合。
15、本申请还提供一种美容组合物或药物，所述美容组合物或药物包含所述的重组人纤连蛋白。
16、本申请还提供将所述的重组人纤连蛋白、所述的核苷酸、所述的重组质粒或所述的宿主细胞在食品、化妆品、保健品或药械领域中的应用。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
18、（1）本专利技术重组人纤连蛋白的基因序列经过密码子优化，构建重组质粒后采用毕赤酵母表达系统表达，表达量高，制备的重组人纤连蛋白生物学活性高、纯度高。
19、（2）本专利技术提供的重组纤连蛋白突变体，可以有效促进细胞增殖活性，提高细胞粘附活性，可在食品、化妆品、保健品、药械等领域应用。
20、（3）本专利技术的制备方法制备方便、纯化过程简单、成本较低，生产周期较短。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种高活性的重组人纤连蛋白，其特征在于，所述人纤连蛋白的氨基酸序列如SEQID No.1所示。
2.编码权利要求1所述人纤连蛋白的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
4.一种重组人纤连蛋白的重组质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求1所述的重组人纤连蛋白的氨基酸序列或权利要求2-3所述的核苷酸序列。
5.一种表达重组人纤连蛋白的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为毕赤酵母。
7.一种制备权利要求1所述重组人纤连蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.权利要求1所述的重组人纤连蛋白在制备美容组合物或药物中的应用，所述美容组合物或药物用于促进细胞黏附、促进细胞增殖和/或促进伤口愈合。
9.一种美容组合物或药物，其特征在于，所述美容组合物或药物包含权利要求1所述的重组人纤连蛋白。
10.权利要求1所述的重组人纤连蛋白、权
...【技术特征摘要】
1.一种高活性的重组人纤连蛋白，其特征在于，所述人纤连蛋白的氨基酸序列如seqid no.1所示。
2.编码权利要求1所述人纤连蛋白的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.3所示。
4.一种重组人纤连蛋白的重组质粒，其特征在于，所述质粒包含权利要求1所述的重组人纤连蛋白的氨基酸序列或权利要求2-3所述的核苷酸序列。
5.一种表达重组人纤连蛋白的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：张健，查锦东，全根，张裴，李江涛，雒雯宣，
申请(专利权)人：杭州医美创新科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。