一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，特点是反转录引物包括十二种腹脑炎脑膜炎病原体与人RNA内参的RT扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.1～NO.13所示，PCR引物包括余下十一种脑炎脑膜炎病原体、人DNA内参、反应内参的正反向PCR扩增引物、十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如SEQID?NO.14～NO.52所示，优点是特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强、成本低、无假阴性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种脑炎脑膜炎病原体的检测试剂盒及其检测方法，尤其是涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
脑炎脑膜炎(brain fever;meningitis)是一种娇嫩的脑膜或脑脊膜(头骨与大脑之间的一层膜)被感染的疾病。此病通常伴有细菌或病毒感染身体任何一部分的并发症，比如耳部、窦或上呼吸道感染。造成脑炎脑膜炎的病原体多种多样，且病变范围、程度相差悬殊，临床表现十分复杂。临床上现行的诊断手段如脑电图、影像学、病原培养、血清学检查等手段不能够快速、准确的鉴别各种病原体，延误治疗，造成其死亡率居高不下，或有严重后遗症，故急需一种高效的脑炎脑膜炎病原体诊断方法。目前，脑炎脑膜炎病原体的传统检测方法主要包括以下几种:(I)病原体检查:即直接做影像及活组织检查，或病原体分离培养，之后在显微镜、电镜下观察，做出诊断。优点:成本低；对实验室硬件要求低。但也存在如下缺点:1)耗时长:一般需3-5天或更长；2)对脑炎患者取脑组织进行活检难以被患者和家属接受；3)诊断效率低:有些病毒无法或极难培养，不同病毒需要不同的分离方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒，包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于：所述的反转录引物包括以下表中十二种脑炎脑膜炎病原体的RT扩增引物与人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下十一种脑炎脑膜炎病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述十二种脑炎脑膜炎病原体的PCR扩增引物与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示：

【技术特征摘要】
1.一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒，包括DEPC水、5 X RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液、IOXPCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于:所述的反转录引物包括以下表中十二种脑炎脑膜炎病原体的RT扩增引物与人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下i^一种脑炎脑膜炎病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增弓I物以及上述十二种脑炎脑膜炎病原体的PCR扩增引物与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示:2.根据权利要求1所述的一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒，其特征在于:所述的X溶液为包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA ;反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向扩增引物带荧光标记。3.根据权利要求1所述的一种同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒，其特征在于:所述的阳性对照品为连接有设计上述二十三种脑炎脑膜炎病原体、RNA内参、DNA内参和反应内参的引物的基因保守序列的pMD18_T的克隆载体。4.一种利用权利要求1-3中任一项所述的同步检测二十三种脑炎脑膜炎病原体的试剂盒的检测脑炎脑膜炎病原体的方法，其特征在于具体包括以下步骤: (1)采集样本并提取核酸采集脑炎脑膜炎病患者的脑脊液或血液的分离培养物，从分离培养物中提取核酸； (2)以患者核酸为模板进行RT反应 取5-20ng/ul的核酸样品RNA5 μ L，DEPC水8 μ L，5 X RT缓冲液4 μ L，RT引物溶液2 μ L，RT酶IyL混匀后加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴勇，黄迎彬，南丽，
申请(专利权)人：海尔施生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：