一种同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种同步检测十五种出血发热病原体及其检测方法，该试剂盒包括DEPC水、5×RT缓冲液、反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，特点是反转录引物包括九种出血发热病原体与人RNA内参的RT扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.1～NO.10所示，PCR引物包括余下六种出血发热病原体、人DNA内参和反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述九种出血发热病原体与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.10～NO.36所示，优点是特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强、成本低、无假阴性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及出血发热病原体的检测试剂盒及其检测方法，尤其是涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
发热 伴出血是危害人类健康的重要传染病，流行广，病情危急，病死率高，危害极大。由于该病有发热症状，故常被误诊为上呼吸道感染。另外常规实验室检查如血液生化检查、血清学检测、以及病毒分离等手段不能快速准确鉴别各种病原体，造成延误治疗甚至使疫情蔓延。因此急需一种高效的出血发热病原体诊断方法。目前，我国出血发热病原体的传统检测方法主要包括以下几种:(I) 一般实验室检查:发病早期检测是否存在蛋白尿、血液转氨酶水平是否升高、白细胞以及淋巴细胞细胞总数变化等。优点:成本低；对实验室硬件要求低。缺点:初期判断，不能确诊。(2)免疫学检查:应用最广泛的是酶联免疫技术(ELISA): —般先用一抗与抗原发生特异性结合，然后用通用的酶标记的二抗与一抗发生特异性结合，再将酶显色，之后观察结果。优点:1)样品通量较高:利用96孔酶标板，一块平板可完成多个样品的检测；2)较敏感:利用酶联的特性，可将原来的抗原信号放大；3)快捷:在时间上，比传本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒，包括DEPC水、5×RT缓冲液，反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于所述的反转录引物包括以下表中九种出血发热病原体的RT扩增引物及人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下六种出血发热病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述九种出血发热病原体的PCR扩增引物及人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示：

【技术特征摘要】
1.一种同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒，包括DEPC水、5 X RT缓冲液，反转录弓丨物、反转录酶、X溶液、10 X PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于所述的反转录引物包括以下表中九种出血发热病原体的RT扩增引物及人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下六种出血发热病原体的正反向PCR扩增引物、人DNA内参的正反向PCR扩增引物、反应内参的正反向PCR扩增引物以及上述九种出血发热病原体的PCR扩增引物及人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示:2.根据权利要求1所述的一种同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒,其特征在于:所述的X溶液为包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA ;反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向扩增引物带荧光标记。3.根据权利要求1所述的一种同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒,其特征在于:所述的阳性对照品为连接有设计上述十五种出血发热病原体、RNA内参、DNA内参和反应内参的引物的基因保守序列的PMD18-T的克隆载体。4.一种利用权利要求1-3中任一项所述的同步检测十五种出血发热病原体的试剂盒的检测出血发热病原体的方法，其特征在于具体包括以下步骤:(I)采集样本并提取核酸采集出血发热患者的血液或咽拭子的分离培养物，从分离培养物中提取核酸； (2)以患者核酸为模板进行RT反应 取5-20ng/ul的核酸样品RNA5 μ L，DEPC水8 μ L，5 X RT缓冲液4 μ L，RT引物溶液2 μ L，RT酶IyL混匀后加入到96孔样品板...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴勇，黄迎彬，南丽，颜进，徐冰，
申请(专利权)人：海尔施生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：