一种快速鉴别诊断不同血清型禽白血病病毒PCR-HRM分析方法的建立技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴别诊断不同血清型禽白血病病毒PCR-HRM分析方法的建立。本发明专利技术的通用引物，简并性好，对禽白血病病毒A、B、C、D和E亚型均有很好地的扩增性，有助于提高PCR的效率，减少病毒鉴别分型的时间；本发明专利技术的特异性引物，特异性好，可以特异性扩增出J亚型。对使用本发明专利技术引物得到的扩增产物进行HRM分析，与已知亚型的标准HRM曲线进行比对，就可以准确、快速、高通量地进行禽白血病病毒分型，特别是可以快速、准确地区分内源型和外源型禽白血病病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种病毒研究方法，特别涉及一种禽白血病病毒的研究方法。
技术介绍
禽白血病(Avian Leukosis, AL)是由禽白血病/肉瘤病毒群病毒(AvianLeukosis / sarcoma virus,AL / SV)引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称。根据临床症状可分为淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞白血病、髓细胞样白血病、结缔组织性肿瘤和骨硬化病等，其中以淋巴白血病最为常见。禽白血病病毒可分为A、B、C、D、E和J共6个亚型。其中，A、B、C、D和J亚型为外源性病毒，而C、D亚型在自然状态下很少存在，E亚型病毒为极普遍存在的内源性病毒。在我国，外源性禽白血病病毒主要为J亚型，A、B亚型报道较少。至今，人类对禽白血病的防治几乎仍无计可施，世界各国控制禽白血病的主要方法是通过早期反复多次的病原检测，淘汰阳性鸡(A、B、J亚型)，从而净化种群达到局部消灭本病的目的。因此，及时准确的对禽白血病病毒进行诊断及分型，特别是区分其内源型和外源型，有助于确定该病毒的流行趋势，进而采取相应的措施加以控制。目前，禽白血病病毒鉴定及血清分型的方法有许多种，包括病毒的分离与鉴定本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴别不同亚型禽白血病病毒的引物，包括两对引物，分别为通用引用引物P1和P2（扩增A、B、C、D和E亚型），以及J亚型特异引物P3和P4，其中：P1：CCTTGCTGCCAACGACACTTA（SEQ?ID?NO：1）P2：GAACCTARCAGYTGTAGTC（SEQ?ID?NO：2）P3：CAGGAAACGTGTGGGTCACC（SEQ?ID?NO：3）P4：TTATTGGACTTACCATCG（SEQ?ID?NO：4）。

【技术特征摘要】
1.鉴别不同亚型禽白血病病毒的引物，包括两对引物，分别为通用引用引物Pl和P2(扩增A、B、C、D和E亚型)，以及J亚型特异引物P3和P4，其中:Pl:CCTTGCTGCCAACGACACTTA (SEQ ID NO:1)P2:GAACCTARCAGYTGTAGTC (SEQ ID NO:2)P3:CAGGAAACGTGTGGGTCACC (SEQ ID NO:3)P4:TTATTGGACTTACCATCG (SEQ ID NO:4)。2.一种快速鉴 别不同亚型禽白血病病毒的方法，包括如下步骤: 1)从样品中提取病毒RNA，并反转录为cDNA； 2)以cDNA为模板，加入上述扩增引物对和荧光饱和染料进行扩增； 3)对扩增产物进行HRM分析，确定病毒的亚型； 其中，所使用的引物如权利要求1所述。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:通用引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭鹏举，张建峰，张春红，嘎利兵嘎，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：