一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括DEPC水，5×RT缓冲液，反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，特点是反转录引物包括以下十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的RT扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.1～NO.12所示，PCR引物包括余下十九种腹泻致病菌、人DNA内参、反应内参的正反向PCR扩增引物、十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如SEQ?ID?NO.13～NO.66所示，优点是特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强、成本低、无假阴性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及腹泻致病菌的检测试剂盒及其检测方法，尤其是涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
腹泻是一种发病率高并流行于世界各地的胃肠道传染病，其发病率仅次于上呼吸道感染，在我国感染性腹泻发病率居所有传染病首位。感染性腹泻是我国的常见病和多发病，病因比较复杂，可由病毒、细菌和原虫引起，近年来时有暴发流行，已经成为当前世界上不断增多的公共卫生问题之一，因此亟需建立多种腹泻致病菌快速高效的诊断方法。目前，腹泻致病菌的传统检测方法主要包括以下几种:(I)粪便常规检查:粪便常规检查法是根据大便性状、粪便镜检、发病年龄及流行季节估计最可能的病原体。光镜镜检时，黏液便、脓血便或血便，可有多量红、白细胞，多见于沙门菌、侵袭性大肠杆菌、肠出 血性大肠杆菌、弯曲菌、耶尔森菌等细菌和某些病毒等所致的腹泻；稀便、水样便，可有少量或无红、白细胞，多见于肠产毒性大肠杆菌、轮状病毒、隐孢子虫、气单胞菌等所致的腹泻，具有成本低，对实验室硬件要求低的优点，但是存在如下缺点:1)灵敏度低，常出现假阴性；2)准确性较低，易造成错诊或误诊。(2)病原学检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒，包括DEPC水，5×RT缓冲液，反转录引物、反转录酶、X溶液、10×PCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于所述的反转录引物包括表中十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下十九种腹泻致病菌、人DNA内参、反应内参的正反向PCR扩增引物、上述十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示。

【技术特征摘要】
1.一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒，包括DEPC水，5 X RT缓冲液，反转录引物、反转录酶、X溶液、IOXPCR缓冲液、PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品，其特征在于所述的反转录引物包括表中十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的RT扩增引物，所述的PCR引物包括表中余下十九种腹泻致病菌、人DNA内参、反应内参的正反向PCR扩增引物、上述十一种腹泻RNA病毒与人RNA内参的PCR扩增引物，基因序列如下表所示。2.根据权利要求1所述的一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒，其特征在于:所述的X溶液包括三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)和通用引物，所述的通用引物正向扩增引物序列为AGGTGACACTATAGAATA ；反向扩增弓丨物序列为GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用弓I物正向扩增引物带荧光标记。3.根据权利要求1所述的一种同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒，其特征在于:所述的阳性对照品为连接有设计上述三十种腹泻致病菌、RNA内参、DNA内参和反应内参的引物的基因保守序列的PMD18-T的克隆载体。4.一种利用权利要求1所述的同步检测三十种腹泻致病菌的试剂盒的检测腹泻致病菌的方法，具体包括以下步骤: (1)采集样本并提取核酸 采集腹泻患者的粪便、呕吐物或血液的分离培养物，从分离培养物中提取核酸； (2)以患者核酸为模板进行RT反应 取5-20ng/ul的核酸样品RNA5 u L，DEPC水8 y L，5 X RT缓冲液4 y L，反转录引物溶液2 ii L,反转录酶I ii L混匀后加入到96孔样品板上进行反转录,反应条件:48° C...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴勇，陈燕芬，南丽，黄迎彬，
申请(专利权)人：海尔施生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：