【技术实现步骤摘要】
用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物及其设计方法
本专利技术属于微生物检测领域，具体涉及一种用于同时检测海洋阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物及其设计方法。
技术介绍
阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌，属于可以通过食物、水进行传播的病原菌。它们的生物学特性和致病性有一定的区别，但都可以引起食物中毒和消化系统疾病。阴沟肠杆菌属于条件致病菌，一般条件下不会引起致病，但也可引起败血症、下呼吸道感染、伤口感染、软组织感染、心内膜炎、泌尿道感染等症状。阴沟肠杆菌能够引起人类重视，主要是因为其可产生超广谱内酰胺酶、AmpC酶，耐药情况严重，并且具备多种其他耐药机制，给临床抗生素治疗带来新的挑战。阴沟肠杆菌耐药机制主要包括产生内酰胺酶、qnr基因介导耐药、整合子、主动外排泵系统作用、药物作用靶位的改变、外膜通透性改变等。这些复杂的耐药机制存在，对于其他细菌混合性感染的抗生素治疗造成无效或疗效甚微。阴沟肠杆菌广泛存在于自然界中，由其引起的海产品食物中毒偶有发生，但是在医院中的传播仅次于大肠杆菌和...
【技术保护点】
一种用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物，其特征在于：该四种致病菌的多重PCR引物分别包括阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物； 其中，阴沟肠杆菌的上下游引物为： P1：5’‑AAGCGHCCNGSNATGTAYATHGG‑3’； P2：5’‑CCNGCNGARTCNCCYTCNAC‑3’； 产单核细胞增生李斯特菌的上下游引物为： P3：5’‑TTCCGCAGAGGACAGTGATG‑3’； P4：5’‑CATATTCCACTTTAACCGTG‑3’； 嗜水气单胞菌的上下游引物为： P5：5’‑AAAGCGGATTATGCAG...
【技术特征摘要】
1.一种用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物，其特征在于:该四种致病菌的多重PCR引物分别包括阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物； 其中，阴沟肠杆菌的上下游引物为:Pl:5’ -AAGCGHCCNGSNATGTAYATHGG-3’ ；P2:5’ -CCNGCNGARTCNCCYTCNAC-3’ ； 产单核细胞增生李斯特菌的上下游引物为:P3:5’ -TTCCGCAGAGGACAGTGATG-3’ ；P4:5’ -CATATTCCACTTTAACCGTG-3’ ； 嗜水气单胞菌的上下游引物为:P5:5’ -AAAGCGGATTATGCAGAAGCACTG-3’ ；P6:5’ -GCTACTTTCTAGCATTTTCTCTGC-3’ ； 副溶血弧菌的上下游引物为:P7:5’ -TGAGTTGCTGTTGTTGGATGC-3’ ；P8:5’ -GTTGATGACACTGCCAGATGC-3’。2.根据权利要求1所述的用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物，其特征在于:所述阴沟肠杆菌引物对应的PCR扩增片段大小为1250bp，所述产单核细胞增生李斯特菌引物对应的PCR扩增片段大小为768bp和272bp，所述嗜水气单胞菌引物对应的PCR扩增片段大小为483bp，所述副溶血弧菌引物对应的PCR扩增片段大小为454bp。3.一种根据权利要求1所述的用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物的设计方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤1，利用引物设计软件设计同时检测阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物组合，所形成的引物组合所包含的引物碱基数为20-24个，引物的熔解温度Tm值为55°C _65°C，引物的6(:%为40% -60% ； 步骤2，对引物组合中的引物进行筛选，保留不形成引物二...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨季芳，管峰，陈吉刚，毛芝娟，
申请(专利权)人：浙江万里学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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