谷子锈菌巢式PCR高效检测方法技术

本发明专利技术涉及一种谷子锈菌巢式PCR高效检测方法，利用谷子锈菌IGS区与其它真菌的IGS区的差异位点，设计两对特异性引物Urs1-F/Urs1-R和Urs2-F/Urs2-R，分别作为巢式PCR扩增的外侧引物对和内侧引物对，以样品DNA为模板进行两轮PCR扩增后对扩增产物进行电泳检测。通过目标片段判定待测病原菌是否为谷子锈菌，或所测谷子叶片是否被谷子锈菌侵染。本发明专利技术的方法对病原基因组DNA的检测灵敏度为100pg/μL，特异性强，可用于快速，准确和灵敏的检测谷子叶片中的锈菌，对谷子锈病的早期诊断及防治具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
谷子锈菌巢式PCR高效检测方法
本专利技术涉及用巢式PCR（nestedPCR）技术对谷子锈菌进行检测，属于植物真菌分子生物学检测

技术介绍
谷子（Setariaitalica）起源于我国，是哺育中华民族的主要粮食作物之一，其种植面积和产量均居世界之首。小米营养丰富，随着世界杂粮热的兴起，出口量在稳步增加，已经成为我国的特色创汇杂粮。谷草是牲畜的优质饲草，在耕地紧缺的情况下是发展畜牧养殖业的首选粮草兼用性作物。但是谷子病害的发生，严重影响着谷子的产量和质量。谷锈病（Uromycessetariae-italicae）是世界谷子产区经常发生的一种气传流行性病害，严重影响着谷子的稳产和高产。谷子锈病病原菌Uromycessetariae-italicae，属担子菌亚门（Basidiomycotina）、柄锈菌科（Pucciniaceae）、单胞锈属（Uromyces）。谷子锈病在谷子的叶片和叶鞘上都可发生，但在叶片上发生更加严重。发病初期，在叶片表面与叶背面，特别是背面产生隆起的夏孢子堆，夏孢子堆成熟后突破寄主表皮而外露，增强了植株的蒸腾作用，使植株丧失大量水分，减少光合作用面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种谷子锈菌巢式PCR高效检测方法，其特征在于：利用谷子锈菌两对特异性引物Urs1‑F/Urs1‑R和Urs2‑F/Urs2‑R，分别作为巢式PCR扩增的外侧引物对和内侧引物对，以提取的谷子叶片总DNA为模板进行PCR扩增反应，扩增产物进行电泳检测，若检测到203bp的目标片段，则说明所测谷子已经被锈菌侵染；该方法可以排除谷子上其它常见病原菌的干扰，准确检测出谷子植株是否感染了锈病。

【技术特征摘要】
1.一种谷子锈菌巢式PCR高效检测方法，其特征在于：利用谷子锈菌两对特异性引物，该特异性引物对由正向外引物、反向外引物、正向内引物和反向内引物组成：正向外引物Urs1-F：5'-GCCTCTAAGTCAGAATCCGTGC-3'；反向外引物Urs1-R：5'-GACGGGATGCGGTAAGTTCA-3'；正向内引物Urs2-F：5'-CGTGCATCTTATA...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志勇，董志平，白辉，马继芳，王楠，董立，全建章，刘磊，
申请(专利权)人：董志平，
类型：发明
国别省市：河北;13