基于NASBA的试纸条检测食源致病菌的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于NASBA的试纸条检测食源致病菌的方法及试剂盒，属于生物检测技术领域。该方法包括如下步骤：（1）提取食源致病菌的RNA；（2）设计扩增引物；（3）进行NASBA反应；（4）设计捕捉探针；（5）制备纳米金探针；（6）制备胶体金核酸试纸条；（7）样品的检测。使用该方法检测单增李斯特菌的试剂盒包括引物（如SEQ?ID?NO.1和2所示）、酶、缓冲液、RNaseH、RNA酶抑制剂、dNTPs、NTPs、探针（如SEQ?ID?NO.4、5和6所示）和胶体金核酸试剂条等。本方法将NASBA与试纸条检测结合，可以实现定性或者定量检测，成本低，检测速度快，特异性好，灵敏度高，使用安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，涉及一种基于NASBA的试纸条检测食源致病菌的方法及试剂盒。
技术介绍
我国是食品消费和生产的世界第一大国，食品安全是重大的民生问题，是国家和人民密切关注的话题。然而近些年我国的食品安全事故频繁发生，食品安全问题已然成为国人心中挥之不去的梦魇。据调查，让人不安的食品安全是导致民众幸福指数较低的主要原因。食源性疾病是食品安全的最大问题，给消费者健康和安全带来严重威胁。食源致病菌是引起食源性疾病的主要致病因子。2011年10月，上海家乐福超市的思念牌三鲜水饺被检出含有金黄色葡萄球菌，该细菌很可能会导致肺炎。2012年4月，广东有两批次婴儿配方奶粉被检出含有阪崎肠杆菌，该病菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和败血症，死亡率高达50%以上。2012年11月，国家质检总局组织了产品质量国家监督抽查，福建省的扭扭虾味条大肠菌群实测值是标准值的100倍以上。食源致病菌一直难以得到及时有效的监控，不仅对食品卫生和人民健康构成严重威胁，也对食品工业和国民经济造成很大的影响。因此，发展一种快速、灵敏、特异、安全的检测食源致病菌的方法对食品安全体系的完善、预防人类食源本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于NASBA的试纸条检测食源致病菌的方法，其特征在于包括如以下步骤：（1）模板的准备：提取食源致病菌的RNA；（2）设计合成两条用于扩增食源致病菌保守序列的引物：T7引物和引物2，T7引物中含有能被T7RNA聚合酶识别的T7启动子序列；（3）NASBA反应：将步骤（1）制备的模板、步骤（2）设计合成的引物进行NASBA扩增反应，得到单链RNA产物；（4）探针的设计：根据单链RNA产物的序列设计三条捕捉探针，探针1和探针2分别和单链RNA产物的两端互补，探针3与探针1完全互补；三条探针的一端都修饰有功能基团；（5）纳米金探针的制备：将步骤（4）中所设计合成的探针1与纳米金连接制备纳米金探针...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邢达，詹芳芳，周小明，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：