环介导等温扩增（LAMP）的序列特异性实时监测制造技术

公开了能够快速区分所选择病原体的所选择株与相同种内其它种群的基于基因的诊断法。可以通过使用寡核苷酸探针，称为“同化探针”，来完成DNA的LAMP的序列特异性实时监测。同化探针包含两条寡核苷酸链，其中一条包含猝灭剂（称为猝灭探针）而另一条包含荧光团（称为荧光探针）。在LAMP反应期间，当所述两条链互相替换时，产生荧光信号。通过监测发射的荧光，可以检测序列特异性扩增。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】环介导等温扩增(LAMP)的序列特异性实时监测相关申请的交叉引用本申请要求于2010年6月22日提交的标题为“用于环介导等温扩增(LAMP)的序列特异性实时监测的系统和方法(SYSTEMS AND METHODS FOR SEQUENCE SPECIFICREALTIME MONITORING OF LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP))”的美国临时专利申请号61/357,428的优先权，该专利申请的全部内容作为参考并入本文并且应认为是本说明书的一部分。有关联邦政府资助的研究开发的声明本专利技术是通过批准号2006-55605-16683和07-55605-17843的政府资助以及美国农业部(USDA-NRI)授予的项目HAW00559-04G进行的。政府对本专利技术具有一定的权利。
技术介绍
病原菌是可以在植物、动物和人类中导致疾病的那些细菌。由于病原菌的多样性，存在大量病原菌和伴随的疾病。这些疾病的实例可以包括植物中的萎蔫病、软腐病和枯萎病，狗中的细小病毒、贾弟虫和洛基山斑疹热，和人类中的肺结核、肺炎和破伤风。由细菌性病原体所引起的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.22 US 61/357,4281.一种监测靶DNA的环介导等温扩增(LAMP)的方法，包括 提供LAMP反应混合物，所述反应混合物包含靶DNA和能够扩增所述靶DNA的一种或多种LAMP引物； 将同化探针加入到所述LAMP反应混合物中，所述同化探针包含第一寡核苷酸链和第二寡核苷酸链，其中所述第一寡核苷酸链包含位于3’端的猝灭探针并且其中所述同化探针的所述第二寡核苷酸链包含结合在5’端的荧光团； 其中加入至所述LAMP反应混合物中的所述第二寡核苷酸链的量与所述第一寡核苷酸链的量的比率小于1:1; 将DNA聚合酶加入到包含所述同化探针的所述LAMP反应混合物中；以及 测量包含所述同化探针和所述DNA聚合酶的所述LAMP反应混合物所发射的荧光。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一寡核苷酸链包含DABCYL、TAMRA和黑洞猝灭剂中的一种。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述荧光团包括荧光素、cy3、cy5和一个或多个量子点中的一种。4.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述第一寡核苷酸链和所述第二寡核苷酸链以相对于彼此的未杂交状态加入到所述LAMP反应混合物中。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述DNA聚合酶的浓度大于或等于8U。6.根据权利要求1所述的方法，其中，加入到所述反应混合物中的所述第一寡核苷酸链的量在O. 02至O. 8μ M之间的范围内。7.根据权利要求1所述的方法，其中，加入到所述LAMP反应混合物中的所述第二寡核苷酸链的量在O. 01μ M至O. 4μ M之间的范围内。8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述LAMP引物包括rsfIiC、r...

【专利技术属性】
技术研发人员：久保田　亮，丹尼尔·M·詹金斯，
申请(专利权)人：夏威夷大学，
类型：
国别省市：