丙型肝炎病毒抑制剂制造技术

本发明专利技术涉及丙型肝炎病毒复制的新型抑制剂。本发明专利技术涉及用作丙型肝炎病毒抑制剂的化合物，以及化合物基于细胞的系统中抑制HCV病毒复制的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术描述新型的丙型肝炎病毒抑制剂及基于细胞系统中抑制HCV病毒复制的应用。
技术介绍
丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus)是一种严重的威胁人类的病原体，全球现有约2亿人携带丙肝病毒，大约是感染艾滋病毒人数的5倍。持续性HCV感染具有潜在严重并发症，可导致肝硬化、肝癌等晚期肝病。因此，HCV感染已成为全球严重的公共卫生问题。HCV隶属于黄病毒(Flaviviridea)科，为有包膜的单股正链RNA病毒，直径40～60nm，分为6个主要基因型即1～6型。HCV的基因组由5’非编码区、3’非编码区及位于其间的单一开放阅读框组成，开放阅读框编码约3000多个氨基酸的NH2-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOH多聚蛋白前体。在宿主细胞和病毒蛋白酶作用下，HCV多聚蛋白裂解形成至少10种具有不同功能的病毒蛋白。其中，C-E1-E2为蛋白结构域，在宿主细胞信号肽酶的作用下分别裂解成核心蛋白C和包膜蛋白E1和E2，其在子代病毒组装中发挥作用；p7是由63个氨基酸残基组成的连接结构蛋白和非结构蛋白的疏水性蛋白，在宿主细胞信号肽酶的作用下释放并形成离子通道，但其在病毒复制和病毒颗粒形成中的作用目前尚不明确；NS2-NS5为非蛋白结构域，NS2为膜内蛋白，它与NS3的N端一起组成NS2/NS3半胱氨酸蛋白酶，通过构象变化后利用自催化机制切断NS2和NS3的连接部位而释放出NS2和NS3蛋白，NS3和NS4A形成的复合物NS3/4A为丝氨酸蛋白酶，该酶依次切断NS3/NS4A、NS4A/NS4B、NS4B/NS5A、NS5A/NS5B连接释放出NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白。一旦这些NS蛋白被切断，它们便组装为膜相关的HCV复制酶复合物。这种复合物不但包含全部的HCVNS蛋白，还含有活化复制态的HCVRNA。功能性HCV复制子体系证实NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B均为复制酶体系的必需组分。通过抑制复制酶体系中一种或多种NS蛋白，都可能干扰甚至完全阻断HCVRNA的复制，理论上这些NS蛋白都可以作为发现HCV特定靶向复制过程中的关键酶。目前，临床上大多采用聚乙二醇化干扰素α(pegylatedinterferonα)和核苷类似物利巴韦林(ribavirin)联合用药治疗丙型肝炎，但是只对50％的HCV基因I型病人有效。而且，干扰素和利巴韦林的联合治疗非常昂贵，并有许多严重的副作用，如疲倦发热、血液分析异常溶血性贫血和抑郁症等。因此，根据HCV的生命周期，寻找特异性的、安全有效的直接作用抗病毒药物(DirectActingAntivirals，简称DAA)是目前丙肝药物研发的迫切需求和重要方向。最近几年，由于病毒基因组学的发展，以病毒复制周期的关键酶为靶标，已有4个小分子抗丙肝药物被美国FDA批准上市。其中，Boceprevir，Telaprevir和Simeprevir是HCVNS3/4A蛋白酶抑制剂，Sofosbuvir是第一个特异性针对HCVNS5B聚合酶的抑制剂。后者可以单独使用，不需要与干扰素和利巴韦林构成联合用药方案，而且临床疗效好，因此受到抗病毒药物市场的热捧。ROW25243化合物(2-(benzo[d]oxazol-2-ylthio)-N-(3，5-bis(trifluoromethyl)phenyl)acetamide)来自于InterBioscreen数据库。本专利技术通过整合现有抗HCVNS5B聚合酶药物和抑制剂数据、计算模型和体外化合物筛选，发现了新结构类型的非核苷HCV抑制剂ROW25243。ROW25243在低浓度(μM)下能有效抑制HCV病毒在宿主细胞Huh7.5.1的复制，有进一步优化成抗HCV候选药物的潜力。对HCV复制的抑制活性为EC50＝1.61μM，细胞毒性为CC50＞51μM，药物治疗指数TI＝31.68，与NS5B聚合酶亲和力KD＝4.67μM，具有进一步开发的前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供化合物ROW25243化合物分子具有一定的抑制HCV病毒细胞活性作用。本专利技术的ROW25243(2-(benzo[d]oxazol-2-ylthio)-N-(3，5-bis(trifluoromethyl)phenyl)acetamide)化合物结构如附图所示：ROW25243分子式：C17H10F6N2O2S。ROW25243分子量：420.33。ROW25243是一个苯并恶唑类化合物，并且含有一个间双三氟基苯结构和酰胺键。ROW25243化合物作为非核苷类抑制剂，通过与NS5B的变构位点结合，使NS5B蛋白构象改变，从而阻止其复制RNA。ROW25243化合物显示出一定的抑制HCV复制的活性的作用，对HCV复制的抑制活性为EC50＝1.61μM，细胞毒性为CC50＞51μM，药物治疗指数TI＝31.68，与NS5B聚合酶亲和力KD＝4.67μM。ROW25243化合物抑制HCV复制的活性的作用是通过自身的分子结构特点决定的。ROW25243结构中酰胺键的羰基与NS5B聚合酶的ThumbII活性口袋内Ser476残基形成氢键作用。间位双三氟甲苯插入到Leu419，Arg422，Met423和Trp528残基构成的一个疏水性口袋构成的疏水性口袋，苯并恶唑环插入到由Leu419，Val485，Ala486，Leu489，Leu497和Met423残基构成的一个较浅的疏水性口袋，从而加强了化合物NSC273937与HCVNS5B聚合酶的亲和力。附图说明附图是ROW25243化合物的结构式图。具体实施方式为了理解本专利技术，下面以实施例进一步说明本专利技术，但不意于限制本专利技术的保护范围。在抗HCV生物活性评估中，由于我们没有直接的HCVNS5B聚合酶检测方法，所以我们运用了HCV活病毒感染宿主细胞(人肝肿瘤细胞Huh7.5.1)的实验系统，检测了化合物在细胞水平上抑制HCV感染和复制的活性，明确了化合物具有抗HCV活性。1.试验原理在HCV病毒感染宿主细胞Huh7.5.1的系统上，将样品进行单浓度，即在5μM浓度下检测其对HCV病毒复制的抑制活性及其细胞毒性，进行抗HCV活性作用的初筛试验。在HCV病毒感染宿主细胞Huh7.5.1的系统上，将上述样品中对HCV病毒复制的抑制活性＞60％以上的样品，进行浓度梯度上检测其抗HCV活性作用，即20μM，2.5μM，0.31μM，0.039μM，0.0049μM，0.00061μM，并计算出细胞毒性CC50和HCV抑制活性EC50。MPA为试验阳性参照物，用于观察试验稳定性.本试验中，使用2a型HCV病毒株为试验材料，对药物的体外抗病毒活性进行测试。所有测试系统中，在病毒基因序列中插入Luciferase报告基因，便于信号测定。HCV的JFH-1病毒株是2005年由科学家Wakita等人自肝炎病人体内获得，是迄今为止唯一可在体外实现感染和复制的HCV病毒株。...

【技术保护点】
一种如下式(I)的化合物，

【技术特征摘要】
1.一种如下式(I)的化合物，
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在与该化合物是一个苯并恶唑类化合物，并且
含有一个间双三氟基苯结构和酰胺键。
3.权利要求1所述的化合物在抑制HCV病毒在宿主细胞Huh7.5.1的复制中的用途。
4.权利要求1所述的化合物的酰胺键羰基与NS5B聚合酶的ThumbII活性口袋内Ser476
残...

【专利技术属性】
技术研发人员：林建平，魏宇，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12