本发明专利技术公开了一种丙型肝炎病毒重组蛋白的制备及其应用，具体地本发明专利技术公开了一种分离的HCV抗原肽，其源自HCV病毒的E2蛋白，并且所述抗原肽可结合于抗HCV的抗体，所述HCV病毒为HCV 1b型Con1毒株。本发明专利技术还提供了含有上述抗原肽的组合物及其制备方法。本发明专利技术的HCV抗原肽，能够高效、特异、广谱地结合感染病人血清中的抗E2抗体，可用于开发检测HCV感染的诊断试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种丙型肝炎病毒重组蛋白的 制备及其应用。
技术介绍
丙型肝炎病毒（HepatitisCvirus,HCV)感染是导致人类肝硬化、肝癌的主要诱 因之一，在世界范围内有约170, 000, 000人感染，感染率高达3%，极大威胁着人类的健康。 目前对于丙型肝炎病毒，尚无预防性或治疗性疫苗可用。 随着临床研究的深入，越来越多的证据表明中和抗体在HCV感染的控制、清除过 程中起着重要的作用。在病人体内，中和抗体的快速诱导，中和抗体的滴度、广度与HCV感 染的清除直接相关。无论黑猩猩实验还是病人临床样本分析均显示，在HCV急性感染过程 中，快速诱导出的中和抗体可以有效控制和清除HCV感染；而在慢性感染病人体内，如果 在感染早期没有诱导出高滴度中和抗体，即便晚期体内诱导出中和抗体，也无法控制病毒 的持续感染。因此，诱导高滴度的中和抗体反应是早期HCV疫苗研发的一个重要指标。然 而，由于HCV本身的高度变异性、血清中脂蛋白成分的包裹、糖基化对中和位点的掩护以及 干扰抗体的作用等原因，早期HCV候选疫苗所产生的抗体往往只对相同亚型病毒有中和效 果，不具有广谱性。 因此，本领域迫切需要开发能够诱导针对所有或大多数亚型病毒的广谱中和抗 体，以便用于开发HCV预防性疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 本专利技术的第一方面，提供了一种分离的HCV抗原肽，所述抗原肽源自HCV病毒的E2 蛋白（尤其是E2蛋白的胞外区），并且所述抗原肽的长度为200-350个氨基酸，并且所述抗 原肽可结合于抗HCV的抗体。 在另一优选例中，所述HCV病毒为HCVlb型病毒；优选地，为Coni毒株。 在另一优选例中，所述的抗原肽具有诱导广谱中和抗体的能力，所述广谱中和抗 体可结合于选自下组的至少6种或全部HCV毒株：Coni,PR52,PR79L9,JFH1，S52,HK6a，H77/ JFH1,Conl/JFHl,J6/JFH1,PR26,PR79L9,J8/JFH1,S52/JFH1,ED43/JFH1,PR26C3mt,SA13/ JFH1,HK6a/JFHl和QC69/JFH1。 在另一优选例中，所述的抗原肽与受体SR-BI的结合活性A1与相应野生型E2蛋 白与受体SR-ΒΙ的结合活性的B1的比值A1/B1彡0. 7,较佳地彡0. 5,更佳地彡0. 2。 在另一优选例中，所述的抗原肽选自下组： ⑷具有SEQIDN0:5、SEQIDN0. :3、SEQIDN0. :4 或SEQIDN0. :2 所示氨基 酸序列的多肽； (B)具有㈧中任一所示氨基酸序列彡80%同源性（优选地，彡90%的同源性； 等优选地彡95 %的同源性；最优选地，彡97 %的同源性）的多肽，且所述多肽具有与抗HCV的抗体的结合能力； (C)将SEQIDN0:2-5中任一所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失 或添加而形成的，且保留与抗HCV抗体结合能力的衍生多肽。 在另一优选例中，所述的抗HCV抗体包括抗HCV野生型E2蛋白抗体，其中包括抗 血清、或抗HCV野生型E2蛋白的对应区域的单克隆抗体。 在另一优选例中，所述的抗原肽选自下组：SEQIDN0:5、SEQIDN0. :3、SEQID NO. : 4、SEQIDNO. :2 或其组合。 在另一优选例中，所述抗原肽采用化学合成或生物工程方法获得，包括重组蛋白、 融合蛋白。 在另一优选例中，所述的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体或抗血清。 在另一优选例中，所述的E2蛋白包括野生型和突变型的E2序列。 本专利技术的第二方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白含有本专利技术第一方面所 述的抗原肽和任选的标签序列和/或连接序列。 在另一优选例中，所述标签序列为6His序列。 本专利技术的第三方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸编码本专利技术第 一方面所述的抗原肽或本专利技术第二方面所述的融合蛋白。 在另一优选例中，所述多核苷酸选自下组： (a)编码如SEQIDN0. : 2-5所示多肽的多核苷酸； (b)序列如SEQIDNO. :9、SEQIDNO. :8、SEQIDN0. :7 或SEQIDN0. :6 所示的 多核苷酸； (c)核苷酸序列与（b)所示序列的同源性彡95% (较佳地彡98% )的多核苷酸； (d)如（b)所示多核苷酸的5'端和/或3'端截短或添加1-60个（较佳地1-30， 更佳地卜1〇个）核苷酸的多核苷酸； (e)与（a)-(d)任一所述的多核苷酸互补的多核苷酸。 本专利技术的第四方面，提供了 一种表达载体，所述表达载体含有本专利技术第三方面所 述的多核苷酸。 本专利技术的第五方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本专利技术第四方面 所述的表达载体，或者在基因组中整合有本专利技术第三方面所述的多核苷酸。 在另一优选例中，所述的宿主细胞包括原核细胞和真核细胞。 在另一优选例中，所述的宿主细胞包括果蝇S2细胞、大肠杆菌、酵母、CH0细胞、DC 细胞等。 本专利技术的第六方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物含有本专利技术第一 方面所述的抗原肽、本专利技术第二方面所述的融合蛋白、本专利技术第三方面所述的多核苷酸、本 专利技术第四方面所述的表达载体或者本专利技术第五方面所述的宿主细胞，以及药学上可接受的 载体和/或辅料。 在另一优选例中，所述的药物组合物为疫苗。 本专利技术的第七方面，提供了一种疫苗组合物，所述的疫苗组合物含有本专利技术第一 方面所述的抗原肽、本专利技术第二方面所述的融合蛋白、本专利技术第三方面所述的多核苷酸、本 专利技术第四方面所述的表达载体或者本专利技术第五方面所述的宿主细胞，以及免疫学上可接受 的载体和/或辅料。 在另一优选例中，所述的疫苗组合物还含有佐剂。 在另一优选例中，所述的佐剂包括氧化铝、皂苷、quilA、胞壁酰二肽、矿物油或 植物油、基于囊泡的佐剂、非离子嵌段共聚物或DEAE葡聚糖、细胞因子（包括IL-1、IL-2、 IFN-r、GM-CSF、IL-6、IL-12 和CpG)。 在另一优选例中，所述佐剂选自：铝佐剂、铝佐剂混合CpG、和弗氏佐剂。 本专利技术的第八方面，提供了本专利技术第一方面所述的抗原肽、本专利技术第二方面所述 的融合蛋白、本专利技术第三方面所述的多核苷酸、本专利技术第四方面所述的表达载体或者本发 明第五方面所述的宿主细胞的用途， (a)用于制备针对所述抗原肽的抗体；和/或 (b)用于制备治疗或预防HCV感染相关疾病的药物；和/或 (c)用于制备检测HCV的试剂或试剂盒；和/或 (d)用于检测抗HCV的抗体。 在另一优选例中，所述的"检测HCV的试剂或试剂盒"包括检测片、检测板、蛋白芯 片、液基芯片、磁珠。 在另一优选例中，所述抗HCV抗体为人体液样品中的抗HCV抗体。优选地，所述体 液是血液或唾液。 本专利技术的第九方面，提供了一种免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方 面所述的用于检测抗HCV抗体的抗原肽。 在另一优选例中，所述试剂盒中可以包括一种或多种本专利技术第一方面所述的用于 检测抗HCV抗体的抗原肽。 在另一优选例中，所述试剂盒还包括载体，所述的抗原肽包被在所述载体上。 在另一优选例中，所述免疫检测试剂盒还包括标记的抗HCV抗体的二抗。二抗用 来检测人血清中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的HCV抗原肽，其特征在于，所述抗原肽源自HCV病毒的E2蛋白，并且所述抗原肽的长度为200‑350个氨基酸，并且所述抗原肽可结合于抗HCV的抗体；优选地，所述HCV病毒为HCV 1b型病毒；更优选地，为Con1毒株。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄忠，钟劲，李大鹏，王雪松，李莉，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。