一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法技术

本发明专利技术公开了一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，包括以下步骤：取感受态细胞于硼硅酸盐玻璃容器中，加入质粒，轻柔吹打混匀；将容器置于超声波清洗仪进行超声转化，转化条件为：温度42℃，频率28KHz，功率80W，超声10～15s后再加入LB培养基，温育复苏。利用本发明专利技术转化方法进行超声波质粒转化率可达到1.35

【技术实现步骤摘要】
一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法。

技术介绍

[0002]质粒转化大肠杆菌是分子生物学中最基本常用的技术，是现代生物研究的基础，具体指将外源质粒导入大肠杆菌细胞。近代以来，研究人员研究开发了多种实现大肠杆菌转化的技术，如热激转化、电转，接合转移等。2007年，Song等提供了一种超声波转化细菌的技术[Song,Y.,et al.,Ultrasound
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mediated DNA transfer for bacteria.Nucleic Acids Res,2007.35(19):p.e129.]，可利用超声波将质粒转入大肠杆菌、假单胞菌等细胞内。2010年，该转化方法的应用范围得到了扩展，革兰氏阳性菌也能利用该方法进行转化[Lin,L.,et al.,Ultrasound
‑
mediated DNA transformation in thermophilic gram
‑
positive anaerobes.PLoS One,2010.5(9):p.e12582.]。
[0003]然而，现有对大肠杆菌超声波质粒转化转化率都比较低，这制约着超声波质粒转化的应用。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，通过筛选转化条件极大的提高了大肠杆菌超声波质粒转化率。
[0005]本专利技术的技术方案如下：<br/>[0006]一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0007](1)取感受态细胞于硼硅酸盐玻璃容器中，加入质粒，轻柔吹打混匀；
[0008](2)将容器置于超声波清洗仪进行超声转化，转化条件为：温度42℃，频率28KHz，功率80W，超声10～15s后再加入LB培养基，温育复苏。
[0009]在本专利技术的另一实施例中，所述的硼硅酸盐玻璃容器为化学分析所用的螺纹口样品瓶。
[0010]在本专利技术的另一实施例中，所述的螺纹口样品瓶为Agilent：5182
‑
0553。
[0011]在本专利技术的另一实施例中，所述的硼硅酸盐玻璃容器的底面积为90～180mm2。
[0012]在本专利技术的另一实施例中，在100μL感受态细胞添加1μL质粒进行超声转化，质粒溶度为20～500ng/μL。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0014]本专利技术的一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，通过考察超声波转化条件，包括容器的材质、底面积、超声功率、频率以及热激与超声波转化的协同效应，得到容器材质为玻璃，底面积为90～180mm2，超声波的功率80W，频率28KHz，得到一可显著提升超声波质粒转化率的方法，特别是将热激与超声波转化进行协同，超声波质粒转化率可达到1.35
×
106。较此前的4.99
×
103CFU/μg提高了约1000倍。因此，本专利技术的大肠杆菌超声波质粒转化的方法显著提高超声波转化率，可较大的推动超声波转化用于质粒转化领域，提升质粒导
入细胞的应用范围。
附图说明
[0015]图1为本专利技术的大肠杆菌超声波转化后，涂布于平板在37℃温育培养的示意图；
[0016]图2为本专利技术的实施例1使用塑料Eppendorf管和液相色谱进样瓶Autosampler vial的超声波质粒转化率示意图，其中，横坐标为Eppendorf tube和Autosampler vial，纵坐标为转化率；
[0017]图3为本专利技术的实施例2使用定制玻璃瓶和Autosampler vial的超声波质粒转化率示意图，其中，横坐标为定制玻璃瓶和Autosampler vial，纵坐标为转化率；
[0018]图4本专利技术的实施例3在不同频率、功率下的超声波质粒转化率示意图；
[0019]图5为本专利技术的实施例4分别在传统热激转化、超声波转化和同时超声热激转化的转化率示意图。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应该理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限定本专利技术的保护范围。在实际应用中本领域技术人员根据本专利技术做出的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0021]实施例1
[0022]首先比较不同材质的转化容器对超声波质粒转化率的影响，仅容器材质存在区别，其他均相同。本实施例1采用实验室最常用的塑料Eppendorf管和液相色谱进样瓶(Autosampler vial)Agilent：5182
‑
0553作容器，其他转化条件均相同的情况下进行超声波转化，每组设置3个样品重复。
[0023]一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，包括以下步骤：
[0024](1)取100μL感受态细胞于容器中，加入1μL质粒(281.7ng/μl)质粒，轻柔吹打混匀；
[0025](2)将该容器置于超声波清洗仪进行超声转化，转化条件为：温度25℃，频率28KHz，功率80W，超声10～15s后再加入900微升LB培养基，37℃温育复苏1小时。
[0026](3)收集菌体，取合适的稀释梯度，每个转化体系涂布至少三个平板，37℃温育培养，次日观察生长情况，并计数，如图1所示。每个转化体系至少稀释3个稀释梯度，每个稀释梯度至少涂布三个平板进行计数，则可得到某一特定条件下的转化率数据。
[0027]实验结果显示：Autosampler vial组的转化率为8.52
×
103CFU/μg，Eppendorf管组的转化率为4.99
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103CFU/μg，因此，Autosampler vial组的转化率明显优于Eppendorf管组，所以，选择玻璃材质的转化容器具有更高的转化率，如图2所示。
[0028]实施例2
[0029]由于容器的底面积直接决定感受态细胞接触超声波的程度，因此，容器的底面积可能会对转化率产生影响。因此，本实施例2订制底面积更大的玻璃瓶(UT vial)与Autosampler vial进行对比，其他转化条件均相同的情况下进行超声波转化，每组设置3个样品重复，其中，玻璃瓶(UT vial)的底面积为180mm2，Autosampler vial的底面积为92mm2。
[0030](1)取100μL感受态细胞于硼硅酸盐玻璃容器中，加入1μL质粒(281.7ng/μl)质粒，
轻柔吹打混匀；
[0031](2)将该容器置于超声容器进行超声转化，转化条件为：温度25℃，频率28KHz，功率80W，超声10～15s后再加入900微升LB培养基，37℃温育复苏1小时。
[0032](3)收集菌体，取合适的稀释梯度，每个转化体系涂布至少三个平板，37℃温育培养，次日观察生长情况，并计数，如图1所示。每个转化体系至少稀本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌超声波质粒转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取感受态细胞于硼硅酸盐玻璃容器中，加入质粒，轻柔吹打混匀；(2)将容器置于超声波清洗仪中进行超声转化，转化条件为：温度42℃，频率28KHz，功率80W，超声10～15s后再加入LB培养基，温育复苏。2.根据权利要求1所述的大肠杆菌超声波质粒转化的方法，其特征在于，所述的硼硅酸盐玻璃容器为化学分析用的螺纹口样品瓶。3.根据权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：高义舟，张萌，菲利普，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：