一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合及其应用。所述引物探针组合包括检测水痘带状疱疹病毒的正向引物、反向引物和探针，所述正向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列，所述反向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列，所述探针的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。本发明专利技术设计用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合的序列，能够实现对水痘带状疱疹病毒ORF63基因进行高特异性和灵敏度扩增，从而可应用与体外扩增技术中，如开发重组酶辅助扩增技术结合横向流动系统，实现简单、廉价和即时检测，对于VZV和/或MPXV防疫等具有重要意义。VZV和/或MPXV防疫等具有重要意义。VZV和/或MPXV防疫等具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合及其应用。

技术介绍

[0002]水痘
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带状疱疹病毒(Varicella zoster virus，VZV)也称为人类疱疹病毒3(HHV
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3)，是一种α
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疱疹病毒，是水痘作为原发性感染和疱疹(带状疱疹)作为复发性感染的病原体，大多数VZV感染会导致水痘，引起发烧和全身瘙痒皮疹，通常发生在儿童时期。
[0003]VZV感染的临床表现与猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)感染的临床表现几乎相同，因此在没有医学实验室检测的情况下通常无法区分。医学实验室检测方法主要有膜抗原免疫荧光抗体检测试验(FAMA)，采用全病毒颗粒，可以检测机体内所有抗水痘病毒表面糖蛋白的抗体，但是并非所有外膜糖蛋白都是中和抗原。FAMA法是目前进行血清中抗体检测的金标准，是检测人群VZV抗体水平最佳的方法，可以较准确的确定免疫效果，已经成为评价其他方法的标准。但这种方法操作繁琐，需专业人士在专门的实验室完成，这使FAMA法不适合大批量的检测血清，较难广泛应用。
[0004]综上所述，提供一种简单、快速、低成本的检测水痘
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带状疱疹病毒的方法，对于易感人群的确定和鉴别、水痘疫苗免疫策略的研究以及疫苗免疫效果的评价等具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合及其应用，开发操作简单、成本低同时能够即时检测水痘带状疱疹病毒的方法。
[0006]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合，所述引物探针组合包括检测水痘带状疱疹病毒的正向引物、反向引物和探针，所述正向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列，所述反向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列，所述探针的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。
[0008]本专利技术中设计用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合的序列，能够实现对水痘带状疱疹病毒ORF63基因进行高特异性和灵敏度扩增，从而可应用与体外扩增技术中，实现对水痘带状疱疹病毒快速、准确检测。
[0009]SEQ ID NO.1：GATGTTAACGGAAAGATGGAATATGGATCTGC。
[0010]SEQ ID NO.2：CGACCCATTAGATAAAAGTCGAGGCATATG。
[0011]SEQ ID NO.3：
[0012]GTACTCCGGGTTGGGAGATCCACCCGGCCAGGCTCGTTGAGGACATCAACCG。
[0013]优选地，所述反向引物的5
’
端修饰有生物素。
[0014]优选地，所述探针含有/idSp/酶切位点，且5
’
端修饰有荧光基团，3
’
端具有阻止扩增的修饰。
[0015]优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中任意一种；
[0016]优选地，所述阻止扩增的修饰包括修饰有羟甲基叠氮、C18、C12、ddNTP、RNA、PNA或C3 spacer中任意一种。
[0017]第二方面，本专利技术提供第一方面所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合在制备检测水痘带状疱疹病毒的产品中的应用。
[0018]第三方面，本专利技术提供一种检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合。
[0019]优选地，所述试剂盒还包括重组酶等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)试剂和侧向流动检测试剂。
[0020]优选地，所述重组酶等温扩增试剂包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶；
[0021]优选地，所述侧向流动检测试剂包括侧流层析试纸。
[0022]本专利技术中，利用设计的高灵敏度、特异性引物组合制备检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒，能够结合重组酶等温扩增试剂和侧向流动检测试剂实现快速即时检测，操作简单、设备要求低。
[0023]可以理解，本领域通用重组酶等温扩增试剂和侧向流动检测试剂均适用于本专利技术，如可选择商品化RAA nfo试剂盒和HybriDetect通用侧向流动检测试剂盒。
[0024]第四方面本专利技术提供第一方面所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合在以非疾病诊断和/或治疗为目的的检测水痘带状疱疹病毒中的应用。
[0025]第五方面，本专利技术提供一种以非疾病诊断和/或治疗为目的的检测水痘带状疱疹病毒的方法，所述方法包括：
[0026]以待测样本中核酸为模板，利用第一方面所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合进行重组酶等温扩增，将扩增产物加到侧流层析试纸上，判断是否为水痘带状疱疹病毒阳性。
[0027]本专利技术的方法可有效应用于非疾病诊断和/或治疗为目的的检测水痘带状疱疹病毒，如对环境样本、食品等进行防疫检测。
[0028]优选地，所述重组酶等温扩增的程序为：37～42℃(例如可以是38℃、39℃、40℃或41℃)，5～20min(例如可以是6min、7min、8min、9min、10min、12min、13min、14min、16min、17min、18min或19min)。
[0029]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0030]本专利技术设计用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合的序列，能够实现对水痘带状疱疹病毒ORF63基因进行高特异性和灵敏度扩增，从而可应用与体外扩增技术中，如开发重组酶辅助扩增技术结合横向流动系统，实现简单、廉价和即时检测，对于VZV和/或MPXV防疫等具有重要意义。
附图说明
[0031]图1为实施例2中灵敏度分析结果图；
[0032]图2实施例2中特异性分析结果图。
具体实施方式
[0033]为进一步阐述本专利技术所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本专利技术作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本专利技术，而非对本专利技术的限定。
[0034]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
[0035]实施例1
[0036]本实施例设计用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合。
[0037]针对VZV(GenBank:NC_001348.1:110581
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111431)的ORF63基因设计引物探针组合，设计实时荧光定量PCR(qPCR)引物和四组RAA扩增引物(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括检测水痘带状疱疹病毒的正向引物、反向引物和探针；所述正向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；所述反向引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列；所述探针的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合，其特征在于，所述反向引物的5
’
端修饰有生物素。3.根据权利要求1或2所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合，其特征在于，所述探针含有/idSp/酶切位点，且5
’
端修饰有荧光基团，3
’
端具有阻止扩增的修饰；优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5中任意一种；优选地，所述阻止扩增的修饰包括修饰有羟甲基叠氮、C18、C12、ddNTP、RNA、PNA或C3 spacer中任意一种。4.权利要求1
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3任一项所述的用于检测水痘带状疱疹病毒的引物探针组合在制备检测水痘带状疱疹病毒的产品中的应用。5.一种检测水痘带状疱疹病...

【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉斯，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：