本发明专利技术涉及表达屈曲病毒多肽的麻疹病毒，特别涉及在其表面含有屈曲病毒包膜和壳体蛋白的病毒样颗粒(VLP)。这些颗粒是施用后能在宿主中复制的重组感染性颗粒。本发明专利技术提供产生这些重组感染性颗粒的工具，特别是核酸、载体、细胞和拯救系统。本发明专利技术还涉及这些重组感染性颗粒，特别是以组合物形式，更特别是以疫苗剂型用于治疗或预防屈曲病毒感染的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及表达屈曲（Chikungunya)病毒多肽的重组麻瘆病毒，特别涉及在其表 面含有屈曲病毒包膜和壳体蛋白的病毒样颗粒（VLP)。这些颗粒是施用后能在宿主中复制 的重组感染性颗粒。本专利技术提供产生这些重组感染性颗粒的工具，特别是核酸、载体、细胞 和拯救系统。本专利技术还涉及这些重组感染性颗粒，特别是以组合物形式，更特别是以疫苗剂 型用于治疗或预防屈曲病毒感染的用途。
技术介绍
屈曲病毒（CHIKV)是披膜病毒科（Togaviridae)家族甲病毒属（Alphavirus)的 正链RNA病毒，于1952年在坦桑尼亚首次分离。 这种病毒的感染引起人类疾病，其特征在于与登革热类似的症状，具有2-5天的 急性发热期，随后是长期的关节痛疾病，影响四肢的关节。CHIKV是非洲、印度和东南亚地方 性的，通过伊蚊（Aedes mosquitoes)经都市或森林传播循环传播。2006年，印度洋的多个 岛（科摩罗、毛里求斯、塞舌尔群岛、马达加斯加、留尼汪岛…）爆发了 CHIKV热，随后波及印 度，在印度据报道预计140万病例。最近，欧洲报道了输入性感染，意大利报道了约200例 地方性病例（Jose, J. et al. , A structural and functional perspective of alphavirus replication and assembly. Future Microbiol, 2009. 4(7) :p. 837-56)。临床上，该 CHIKV 流行伴随着比之前爆发更严重的症状，据报道有严重的多关节痛和肌痛、并发症和死亡。 CHIKV基因组是11. 8kb的具有正极性的单链RNA分子。该病毒与西门利克森林 病毒（SFV)、辛德毕斯病毒（SINV)和其他旧大陆甲病毒密切相关，而与新大陆甲病毒如 委内瑞拉马脑炎病毒较为疏远（Griffin, D.E·，Alphaviruses, in Fields Virology, 5th ed. , D. M. Knipe, Editor 2007, Wolters Kluwer, Lippincott Williams&ffilkins. p.1023-1067)。基因组RNA经加帽并直接翻译成名为P1234的全长非结构聚蛋白（nsP)， 其由基因组 5 '的三分之二编码（Jose, J.，J. Ε· Snyder, and R. J. Kuhn, A structural and functional perspective of alphavirus replication and assembly. Future Microbiol, 2009. 4(7):p. 837-56 ；Kuhn,R.J. , Togaviridae: the viruses and their replication, in Fields Virology, 5th ed.,D.M.Knipe, Editor 2007,Wolters Kluwer, Lippincott Williams&Wilkins. p. 1001-1022)。该前体自我切割产生 P123 和具 有RNA依赖的RNA聚合酶活性的nsP4。这些蛋白与细胞辅因子一起装配成产生反义基因 组RNA分子的复制复合物。P123随后切割成nsPl和P23,产生制备有义和反义基因组RNA 的聚合酶复合物。P23进一步切割成nsP2和nsP3,产生仅制备正义基因组RNA分子的聚 合酶复合物。除了复制病毒基因组，该病毒蛋白复合物从病毒基因组的3'端转录26S亚 基因组RNA。该信使RNA翻译为聚蛋白前体，其由病毒和细胞酶的组合切割产生壳体蛋白 (C)、两个主要的包膜蛋白（El和E2)以及两个较小的附属肽E3和6k。一旦装配，CHIKV病 毒体为直径65 - 70nm的球形颗粒，基本上由与壳体蛋白相关的基因组RNA分子组成，并包 被在宿主来源的脂膜中，其由组装成二十面体晶格的E1-E2异二聚体装饰（Voss，J. E.，et al. , Glycoprotein organization of Chikungunya virus particles revealed by X-ray crystallography. Nature, 2010. 468(7324):p. 709-12)〇 病毒演化和向新的地理区域传播所体现的疾病的严重性是需要应对的严重的公 众健康问题。为了解决该问题，已经开发了具有减毒活病毒、具有嵌合甲病毒、具有重组DNA 或具有病毒样颗粒的疫苗。 一种福尔马林失活疫苗经证实在非人灵长类和人中具有免疫原性，但需要 在BSL-3条件下制备大规模免疫所需的大量抗原限制了该策略的发展（Tiwari，M.，et al. , A ssessment of immunogenic potential of Vero adapted formal in inactivated vaccine derived from novel ECSA genotype of Chikungunya virus. (Vaccine, 2009. 27(18) :p. 2513-22)。由美国陆军开发的减毒活 TSI-GSD-218CHIKV 疫苗 具有免疫原性，但在II期临床试验中产生与毒力回复有关的副作用，引发安全问题。因 此，尽管基于获得减毒活病毒的疫苗所获结果表明通过这种方式能获得有效的免疫，这 些疫苗仍旧受到质疑，因为存在可能副作用的风险（Edelman R et al. ,Am J Trop Med Hyg. 2000Jun ;62 (6) : 681-685)。编码来自CHIKV的El、E2和壳体蛋白的嵌合甲病毒疫苗策 略在小鼠中具有免疫原性（Wang, E.，et al·，Chimeric alphavirus vaccine candidates for Chikungunya. (Vaccine，2008. 26(39) :p. 5030-9)，但甲病毒易于重组的能力产生了 影响这些策略发展的安全问题（Weaver，S.C.，et al·，Recombinational history and molecular evolution of western equine encephalomyelitis complex alphaviruses. J Virol，1997. 71 (1) :p. 613-23)。 另一种已开发的策略是设计重组DNA构建体用作疫苗。编码E1、E2和壳体蛋白的 基于DNA的CHIKV疫苗已被证实在小鼠和非人灵长类中具有免疫原性（Muthumani，K.，et al.,Immunogenicity of novel consensus-based DNA vaccines against Chikungunya virus. Vaccine, 2008. 26(40) :p. 5128-34 ；MalIilankaraman,K. , et al. , A DNA vaccine against chikungunya viru本文档来自技高网...
【技术保护点】
核酸构建体，其包含编码至少一种屈曲病毒(CHIKV)结构蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接、特别是克隆入cDNA分子，所述cDNA分子编码麻疹病毒(MV)全长、感染性反基因组(+)RNA链的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：F·坦吉，S·布兰德勒，P·德普雷，A·哈贝尔，
申请(专利权)人：巴斯德研究院，特密斯生物科学有限责任公司，国立科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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