本发明专利技术公开了一种AKT3基因突变检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对G171R位点的SEQ?ID?NO.7及SEQ?ID?NO.8；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现突变位点的野生型和突变型并行检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种AKT3基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
AKT是病毒癌基因v-akt的人类同源基因，编码丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，在PI3K相关的信号通路中起重要的作用，影响细胞的生存、增殖和侵袭，参与包括细胞凋亡和葡萄糖·代谢在内的细胞过程。目前研究表明，在肺癌和乳腺癌中，AKT基因激活与化疗药物抗性显著相关，AKT3基因的疗效相关突变主要有G171R，G171R(511G>A)突变是第171位的密码子编码的甘氨酸突变为精氨酸，AKT3基因突变已成为药效研究的热点。目前，对AKT3基因突变进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供AKT3基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于检测AKT3基因常见基因型G171R的野生型和突变型。实现上述目的的技术方案如下一种AKT3基因突变检测液相芯片，包括有(A).针对AKT3基因G171R位点的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag 序列分别选自 SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 6中的不同两种；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 14，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有Gl7IR位点的目标序列的引物。优选地，所述扩增引物为SEQ ID NO. 15 SEQ ID NO. 16。优选地，所述ASPE引物为^SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 7组成的序列以及由SEQID NO. 2和SEQ ID NO. 8组成的序列。本专利技术的另一目的是提供用于AKT3基因突变检测的特异性引物。具体技术方案如下用于AKT3基因突变检测的特异性引物，其为SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8。本专利技术的主要优点在于1.本专利技术所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100%，且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需要。所制备的AKT3基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及ant1-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、ant1-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个SNP位点的并行检测。2.本专利技术设计的ASPE引物特异性引物能够灵敏特异地识别目标检测的突变位点，准确区分各种型别的基因型；在同一个反应体系中，不同的特异性 引物之间、特异性引物与非目标检测的PCR扩增产物之间基本上不存在交叉反应，检测特异性好，交叉反应率低于3% ;除了能够检测单个位点突变情况，也能够同时并行检测多个突变位点的突变情况，检测效果一致。3.本专利技术不仅克服了传统固相芯片敏感性不高，检测结果的可重复性差的缺陷，同时对现有的液相芯片技术进行改进，使得所制备微球能适用于不同的检测项目，具有很强的拓展性。检测的荧光信号值大大提高，从而使得检测的灵敏度进一步得到提高，信噪比增强，检测结果更加准确可靠。具体实施例方式实施例1 AKT3基因突变检测液相芯片，主要包括有一、ASPE 引物针对AKT3基因常见基因型G171R的野生型和突变型，分别设计特异性引物序列。ASPE引物由“tag序列+特异性引物序列”组成。ASPE引物序列如下表所示表I AKT3基因的ASPE弓丨物序列中的tag序列 SEQ ID NO.~~tag 序歹[I ~ICAATAAACTATACTTCTTCACTAA ~2TCAAAATCTCAAATACTCAAATCA 3CTTTTCAATTACTTCAMTCTTCA ~ATTATTCACTTCAAACTAATCTAC 5CTTTTCATCTTTTCATCTTTCAAT 6CTTTCAATTACAATACTCATTACA表2 AKT3基因的ASPE弓丨物序列中的特异性引物序列权利要求1.一种AKT3基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有(A).针对AKT3基因G171R位点的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为SEQID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8 ;所述 tag序列分别选自 SEQ ID NO.1 SEQ ID NO. 6 中的不同两种；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 14,且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有G171R位点的目标序列的引物。2.根据权利要求1所述的AKT3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为SEQ IDN0. 15 SEQ ID NO. 16。3.根据权利要求1或2所述的AKT3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述ASPE引物为由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 7组成的序列以及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 8组成的序列。4.根据权利要求1或2所述的AKT3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10 个 T。5.用于AKT3基因突变检测的特异性引物，其特征是，所述特异性引物为SEQID NO. 7和 SEQID N08。全文摘要本专利技术公开了一种AKT3基因突变检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对G171R位点的SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现突变位点的野生型和突变型并行检测。文档编号C12N15/11GK102994618SQ20111026977公开日2013年3月27日 申请日期2011年9月13日 优先权日2011年9月13日专利技术者许嘉森, 郭靖, 罗小笛 申请人:广州益善生物技术有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种AKT3基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：(A).针对AKT3基因G171R位点的野生型和突变型的ASPE引物：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：SEQID?NO.7和SEQ?ID?NO.8；所述tag序列分别选自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.6中的不同两种；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti?tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti?tag序列选自SEQ?ID?NO.9～SEQ?ID?NO.14，且所述anti?tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有G171R位点的目标序列的引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，郭靖，罗小笛，
申请(专利权)人：广州益善生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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