【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养
，具体而言，涉及以取自活体内蒙古白绒山羊耳部皮肤组织块为材料，同时分离内蒙古白绒山羊皮肤成纤维细胞和表皮细胞的原代培养方法。
技术介绍
内蒙古白绒山羊是经过长期自然选育形成的优良地方性绒肉兼用型品种，所产羊绒具有径细绒长、综合品质优良的特点。然而，由于近年来草场退化，种群数量增加，舍饲比例加大，导致内蒙古白绒山羊的产绒量降低。通过转基因技术导入促进毛囊发育和绒毛生长的功能基因，培育高产绒量新品系是解决这一问题的有效手段。在高产绒量转基因绒山羊新品系的研究中，构建功能基因的皮肤特异性表达载体是关键步骤之一，而实现功能基因在皮肤特异性表达的关键在于构建载体时在功能基因上游引入皮肤特异性表达的启动子元件，以驱动功能基因的表达。在实际操作中，选择的皮肤特异性 启动子的功能首先需得到验证，具体包括两个方面一方面是这个启动子在皮肤细胞中的有效性，即是否工作及工作效率如何；另一方面是启动子的特异性，即应该是只在皮肤细胞中表达，在其它细胞中不表达或表达微弱。要实现启动子功能的验证，唯一简单的办法是将含有皮肤特异性启动子的载体同时转染皮肤细胞和其它非...
【技术保护点】
一种同时分离内蒙古白绒山羊皮肤成纤维细胞和表皮细胞的原代培养方法，其特征在于：皮肤成纤维细胞株和表皮细胞株的构建包括以下步骤：（1）采样:从雄性成年内蒙古白绒山羊个体的耳尖部取皮肤组织，用含双抗的生理盐水冲洗，然后去除附着在皮肤上的脂肪和结缔组织基膜层，露出真皮层后，置于70?75%酒精中浸泡约45?60s后，再用含双抗的PBS洗涤，置于含双抗的DMEM/F12培养液中，剪碎；（2）内蒙古白绒山羊耳部皮肤组织原代培养:将皮肤组织块均匀接种在培养瓶的瓶壁，加入含胎牛血清、表皮细胞生长因子和双抗的DMEM/F12培养液，拧紧瓶盖，以组织块在上、培养液在下的方式放入培养箱，静置3...
【技术特征摘要】
1.一种同时分离内蒙古白绒山羊皮肤成纤维细胞和表皮细胞的原代培养方法，其特征在于皮肤成纤维细胞株和表皮细胞株的构建包括以下步骤 (1)采样从雄性成年内蒙古白绒山羊个体的耳尖部取皮肤组织，用含双抗的生理盐水冲洗，然后去除附着在皮肤上的脂肪和结缔组织基膜层，露出真皮层后，置于70-75%酒精中浸泡约45-60s后，再用含双抗的PBS洗涤，置于含双抗的DMEM/F12培养液中，剪碎； (2)内蒙古白绒山羊耳部皮肤组织原代培养将皮肤组织块均匀接种在培养瓶的瓶壁，加入含胎牛血清、表皮细胞生长因子和双抗的DMEM/F12培养液，拧紧瓶盖，以组织块在上、培养液在下的方式放入培养箱，静置3 4h后，轻轻将培养瓶翻转，使培养液浸没组织块，在培养箱内静置培养，每2-4d更换一次新鲜培养液,培养ll-17d后,得到皮肤成纤维细胞与上皮细胞的混合原代细胞培养物； (3)皮肤成纤维细胞与上皮细胞的分离与纯化将步骤(2)所得混合原代细胞培养物用PBS清洗，再用l-2mL含O. 25%胰蛋白酶和O. 02%EDTA的D-Hanks液消化，至大部分细胞回缩及有少量细胞漂起后，立即终止消化，用移液枪吹打使细胞悬浮，吸取细胞悬液离心弃上清后，接种入新的培养瓶中，放入培养箱培养，通过2 3次选择传代，得纯化...
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