本发明专利技术的课题是提供一种向心肌细胞特异性分化诱导的心肌前体细胞、一种制备该心肌前体细胞的方法。如果使用具备下述步骤的CD82阳性细胞的制备方法，则能够制备用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞，该制备方法依次具备如下步骤：获得干细胞的步骤(a)；对干细胞进行向心血管细胞分化诱导的处理的步骤(b)；以及从在步骤(b)中经分化诱导处理的干细胞中分离CD82阳性细胞的步骤(c)，该CD82阳性细胞是选自CD73、CD44、CD105、CD121a、CD18和CD120a中的至少一个细胞表面标记为阴性的细胞。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种选自CD73、CD44、CD105、CD121a、CD18和CD120a中的至少一个细胞表面标记为阴性的用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞、一种包含该CD82阳性细胞的心脏病治疗剂、一种上述CD82阳性细胞的制备方法、一种通过该制备方法得到的用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞。
技术介绍
心脏病在各发达国家中位列死因的前位，例如，根据2011～2013年日本厚生劳动省的死因统计资料，报告了心脏病在日本的死因中高居第二位。狭心病和心肌梗塞这样的缺血性心脏病的发病原因是冠状动脉内变窄或者冠状动脉中血栓堵塞所导致的流向心肌的血流停滞。为治疗该缺血性心脏病，一直施行用导管来改善血流的介入治疗，但一旦心肌发生坏死则不能通过介入治疗来再生。因此，在因缺血消除后存活心肌的减少而导致的重度心力衰竭的病情、或者虽不是由缺血导致的但心肌细胞慢性进行性地逐渐丧失而发展为心力衰竭的病情等心脏病中，尚无有效的治疗方法已成为临床上的问题。多能干细胞是具有能够分化为存在于生物体内的所有细胞的能力的细胞，胚胎干细胞(ES细胞)是其代表例。一直期待人ES细胞利用该性质而应用到心肌再生医疗等再生医疗中，但是存在由于移植分化的ES细胞而引发排斥反应的问题。近年来，山中等人的研究小组报告了通过使用小鼠体细胞进行四种因子(Oct3/4、Sox2、Klf4和c-myc)的表达来诱导去分化，开发出具有类似于ES细胞的多能性和增殖能力的诱导性多能干细胞，即所谓的iPS细胞(Inducedpluripotentstemcell)(非专利文献1)，并在随后报告了从人的分化细胞也可以制作iPS细胞(非专利文献2)。该人iPS细胞可以使用作为治疗对象的患者来源的细胞来制作，因此作为用于制备无排斥反应的心肌组织的工具而受到期待。因此，希望尽快建立使用人iPS细胞的心肌再生疗法。使用人iPS细胞的心肌再生疗法中，认为能成为供给源的细胞候选是由人iPS细胞分化诱导而成的心肌细胞和处于其分化前阶段的心肌前体细胞。在使用由人iPS细胞分化诱导而成的心肌细胞进行心肌再生疗法时，心肌细胞基本不增殖，而且在受体心脏的成活率也低，因此考虑在由人iPS细胞分化诱导对于移植足够数量的心肌细胞，并制成在心脏成活率提高的心肌细胞膜片后再进行给予。另一方面，在使用心肌前体细胞进行心肌再生疗法时，首先关键是对特异性分化为心肌的前体细胞进行分离纯化。作为心肌前体细胞，例如，GordonKeller等人报告了KDR阳性PDGFRα阳性细胞(非专利文献3、4)。但是，KDR和PDGFRα在早期的中胚层中也观察到有表达，因此不能认为是能够对具有心肌特异性分化能力的细胞群进行特定的细胞表面标记。此外，最近IrvingL.Weissman等人报告了CD13和ROR2作为心肌和血管前体细胞(心血管前体细胞)的细胞表面标记(非专利文献5)。虽然确实CD13阳性ROR2阳性细胞中包含能够分化为心肌的细胞，但也包含能够分化为心肌以外的血管内皮或血管壁的细胞。此外，在原条(primitivestreak)期的早期的中胚层中也观察到CD13和ROR2表达，因此不能认为CD13和ROR2是能够对具有心肌特异性分化能力的细胞群进行特定的细胞表面标记。此外还报告了Nkx2.5、islet1、Tbx5、Tbx20、GATA4、MEF2C等作为心肌前体细胞的标记(非专利文献6)，但这些均不是细胞表面标记而是转录因子，因此当对表达这些转录因子的心肌前体细胞进行分离纯化时，需要进行基因改造等，不能对保持原样的心肌前体细胞进行分离纯化。此外，报告了采集心肌组织并直接对其中含有的向心肌细胞分化的能力优异的多能干细胞进行选择/分离纯化的方法(专利文献1)，但是从将心肌组织作为供给源的角度来看，不能保证得到用于治疗的足够细胞数，而且能否进行临床应用也存在疑问，除此之外，从需要获得心肌组织供体的角度来看，难以认为其在通用性上优异。因此，需要对具有心肌特异性分化能力的心肌前体细胞的细胞表面标记进行鉴定。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2006/093276号公报非专利文献非专利文献1：Takahashi,K.etal.,Cell126:663-676(2006)非专利文献2：Takahashi,K.etal.,Cell131:861-872(2007)非专利文献3：Abbott,G.W.etal.,Nature453:524-528(2008)非专利文献4：Kattman,S.J.etal.,CellStemCell8:228-240(2011)非专利文献5：Ardehali,R.etal.,ProcNatlAcadSciUSA.110:3405-3410(2013)非专利文献6：Burridge,P.W.etal.,CellStemCell10:16-28(2012)
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的课题是提供一种向心肌细胞特异性分化诱导的心肌前体细胞、一种制备该心肌前体细胞的方法。用于解决课题的技术方案本专利技术人等为了解决上述课题而不断进行了努力研究。在其过程中，发现了从人iPS细胞向心肌细胞进行分化诱导处理后，从第4天到第5天，开始出现特异性分化为心肌细胞的心肌前体细胞。此外，还发现了该心肌前体细胞是CD82阳性细胞。进一步地通过体外(invitro)和体内(invivo)的分析，确认了该CD82阳性细胞在各种培养条件下或向各种组织/脏器的移植中也一直高效地分化诱导成心肌细胞。本专利技术正是基于上述的发现而完成的。即，本专利技术涉及(1)，一种用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞，其是选自下面的[细胞表面标记A组]中的至少一个细胞表面标记为阴性的细胞。[细胞表面标记A组]：CD73、CD44、CD105、CD121a、CD18、CD120a。此外，本专利技术涉及(2)，经分离纯化而得到的上述(1)所述的CD82阳性细胞；(3)，上述(1)或(2)所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的[细胞表面标记B组]中的至少一个细胞表面标记为阴性、和/或选自下面的[细胞表面标记C组]中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞。[细胞表面标记B组]：CD7、CD37、CD43、CD144、STRO-1、CD177、CD163，[细胞表面标记C组]：CD137L、CD140b、CD180、CD252、CD344、CD118、CD99R。此外，本专利技术涉及(4)，上述(1)～(3)中任一项所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的[细胞表面标记D组]中的至少一个细胞表面标记为阴性、和/或选自下面的[细胞表面标记E组]中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞。[细胞表面标记D组]：CD49a、CD117、CD31、CD106、CD45、CD14、HLA-DR、CD38、CD121b、CD122、CD124、CD126、CD127、CD11a、CD104、CD62e、CD62l、CD62p、CD120b、CD34、CD4，[细胞表面标记E组]：CD166、CD304、CD90。此外，本专利技术涉及(5)，上述(1)～(4)中任一项所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的[细胞表面标记F组]中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞。[细胞表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞，其是选自下面的细胞表面标记A组中的至少一个细胞表面标记为阴性的细胞，细胞表面标记A组：CD73、CD44、CD105、CD121a、CD18、CD120a。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.01 JP 2014-0947751.一种用作心肌前体细胞的CD82阳性细胞，其是选自下面的细胞表面标记A组中的至少一个细胞表面标记为阴性的细胞，细胞表面标记A组：CD73、CD44、CD105、CD121a、CD18、CD120a。2.根据权利要求1所述的CD82阳性细胞，其是经分离纯化而得到的。3.根据权利要求1或2所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的细胞表面标记B组中的至少一个细胞表面标记为阴性、和/或选自下面的细胞表面标记C组中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞，细胞表面标记B组：CD7、CD37、CD43、CD144、STRO-1、CD177、CD163，细胞表面标记C组：CD137L、CD140b、CD180、CD252、CD344、CD118、CD99R。4.根据权利要求1～3中任一项所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的细胞表面标记D组中的至少一个细胞表面标记为阴性、和/或选自下面的细胞表面标记E组中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞，细胞表面标记D组：CD49a、CD117、CD31、CD106、CD45、CD14、HLA-DR、CD38、CD121b、CD122、CD124、CD126、CD127、CD11a、CD104、CD62e、CD62l、CD62p、CD120b、CD34、CD4，细胞表面标记E组：CD166、CD304、CD90。5.根据权利要求1～4中任一项所述的CD82阳性细胞，其是选自下面的细胞表面标记F组中的至少一个细胞表面标记为阳性的细胞，细胞表面标记F组：ROR2、CD13、PDGFRα、KDR。6.根据权利要求1～5中任一项所述的CD82阳性细胞，其用冷冻保存。7.一种心脏病治疗剂，其包含权利要求1～6中任一项所述的CD82阳性细胞。8.一种CD82阳性细胞的制备方法，其具备下面的步骤(a)～(c)：(a)获得干细胞的步骤；(b)对干细胞进行向心血管细胞分化诱导处理的步骤；(c)从在步骤(b)中经分化诱导处理的干细胞中分离CD82阳性细胞的步...
【专利技术属性】
技术研发人员：山下润，武田匡史，
申请(专利权)人：爱心细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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