破骨细胞培养试剂盒及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种破骨细胞培养试剂盒及制备方法和应用。本发明专利技术人经研究发现骨髓单核巨噬细胞在-80℃冻存1年内，其向破骨细胞分化能力未有改变，即一次性获取足够数量骨髓单核巨噬细胞后，即可分装冻存，根据实验需要随时复苏细胞用于破骨细胞培养，省去了现有破骨细胞诱导法的动物原代取材步骤。本发明专利技术试剂盒操作简捷，在较短时间内（一周）即可获得大量具有骨吸收能力的破骨细胞。该试剂盒所培养的破骨细胞可应用于破骨细胞相关的生物学和分子生物学实验，还可应用于筛选骨吸收的抑制剂和促进剂等药物的研发以及与破骨细胞相关疾病的发病机制研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种破骨细胞培养试剂盒及其制备方法和应用，具体地说涉及一种利用细胞冻存技术长期保持骨髓单核巨噬细胞向破骨细胞分化的能力；在此基础上，再联合细胞因子诱导培养破骨细胞的方法。属于医学与生物

技术介绍
目前，破骨细胞(0steOClast，0C)是机体内唯一具有骨吸收功能的细胞。在骨代谢过程中，破骨细胞与成骨细胞相互协作，保障骨重建顺利进行，维持骨代谢的动态平衡。破骨细胞缺失或功能异常均能导致骨代谢疾病，如骨质硬化和骨质疏松等；除此之外，破骨细胞还参与肿瘤、炎症和自身免疫性疾病的发生、发展，影响疾病的转归和预后。近二十年来，体外培养破骨细胞方法主要应用于如下研究领域一、研发破骨细胞生成和功能促进剂和抑制剂，人们正在不断努力尝试把上述发现应用到代谢性和免疫性骨病的临床治疗；二、将破骨细胞引入骨组织工程领域，将其与成骨细胞共同种植于矿化支架上，改善了组织工程化骨的重建结构；三、不断发现新的破骨细胞生物标志物应用于临床，用来监测骨吸收状态，反映机体骨代谢稳态；四、应用于代谢性和免疫性骨病的发病机制研究中，极大的促进了骨骼疾病分子发病机制研究进展。综上所述，建立体外破骨细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种破骨细胞培养试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括如下三个试剂：试剂A，即冻存的骨髓单核巨噬细胞；试剂B，即骨髓单核巨噬细胞培养液和试剂C，即破骨细胞诱导培养液；其中，试剂A为?80℃冻存的雄性C57BL/6小鼠骨髓单核巨噬细胞；其中，试剂B是通过将M?CSF、胎牛血清和青链霉素溶于α?MEM培养液中制备得到；其中，试剂C是通过将RANKL、M?CSF、胎牛血清和青链霉素溶于α?MEM培养液中制备得到。

【技术特征摘要】
1.一种破骨细胞培养试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括如下三个试剂试剂么，即冻存的骨髓单核巨噬细胞；试剂B，即骨髓单核巨噬细胞培养液和试剂C，即破骨细胞诱导培养液； 其中，试剂A为-80°C冻存的雄性C57BL/6小鼠骨髓单核巨噬细胞； 其中，试剂B是通过将M-CSF、胎牛血清和青链霉素溶于a -MEM培养液中制备得到； 其中，试剂C是通过将RANKL、M-CSF、胎牛血清和青链霉素溶于a -MEM培养液中制备得到。2.如权利要求I所述的破骨细胞培养试剂盒，其特征在于试剂B中各组分终浓度为M-CSF 30ng/ml，胎牛血清的体积百分数为10%，青链霉素浓度为100U/ml。3.如权利要求I所述的破骨细胞培养试剂盒，其特征在于试剂C中各组分终浓度为RANKL 100ng/ml, M-CSF 30ng/ml，胎牛血清的体积百分数为10%，青链霉素浓度为100U/ml o4.如权利要求I所述的破骨细胞培养试剂盒，其特征在于试剂A是按照以下方法的制备得到从已脱颈处死的雄性C57BL/6小鼠身上无菌取出股骨和胫骨，剥净其上软组织，减去骨两端，用吸满a -MEM培养液的5ml注射器从骨的一端插入骨髓腔，冲洗出腔内红色骨髓块；用玻璃吸管轻轻吹打骨髓细胞液以获得单一细胞悬液...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴俊瑞，孙殿军，高彦辉，李丙云，
申请(专利权)人：哈尔滨医科大学，
类型：发明
国别省市：