一种手足口病分型检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种手足口病分型检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒利用双抗体夹心原理将柯萨奇病毒A16型膜壳蛋白1（CA16VP1)和肠病毒71型膜壳蛋白1（EV71VP1）的抗体包被于硝酸纤维膜中，用于检测手足口病患者咽拭子或粪便中不同类型的手足口病病毒抗原：CA16VP1阳性则为柯萨奇病毒A16型感染，而EV71VP1阳性则为肠病毒71型感染。本发明专利技术提供的试剂盒能够直接即时（数分钟内）检测手足口病患儿咽拭子或粪便中病毒抗原，并能同时检测EV71和CA16两种病原体，对手足口病患儿分型诊断，且操作简单，不需特殊仪器，适合于各级医疗机构和疾病控制中心使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及一种手足口病分性检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
手足口病(hand food and mouth disease, HFMD )是一种以手足皮肤和口腔粘膜疱疹为主要症状的小儿急性传染病。手足口病在国外1957已有报道，1981年我国由上海首次报告了手足口病疫情，近年来，EV71病毒的流行在亚太地区呈上升趋势，引发HFMD的肠道病毒有20多种(型)，其中柯萨奇病毒A16型(Coxsckievirus A16, CA16)和肠病毒71型(enterovirus71，EV71)最为常见。通常情况下，EV71感染引起的HFMD在临床症状等方面与CA16感染所引起的HFMD难以区别。CA16感染所致的患者可引发心肌炎、心包炎等并发症，而EV71感染容易引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎及由此引发急性驰缓性瘫痪、肺水肿和出血等严重并发症，死亡率较高。2008年春季在我国安徽阜阳地区暴发的手足口病，使数千名儿童受感染，19例患儿因并发脑干脑炎、肺水肿和出血死亡，经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测和病毒培养证实为EV71感染所致。我国卫生部已于2008年5月2日将手足口病纳入丙类传染病管理。为了能对HFMD做到早发现、早分型诊断、早治疗，积极预防并发症，建立HFMD快速分型检测方法尤为重要。目前较常用的仍为病毒培养分离及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，这两种方法需要昂贵的设备和严格的实验室条件，而且检测时间需要数天至数周，不利于临床及时诊断和治疗，目前这两种方法仅限在疾病控制中心和少数研究机构，大多数医院均无条件开展。胶体金免疫法(colloidal gold immunoassay,CGIA)是20世纪90年代初建立的一种简易快速稳定的免疫学检测技术，最初由Beggs等首先应用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)测定。现已广泛用于幽门螺杆菌、肝炎、梅毒、艾滋病等传染性疾病抗原抗体及激素、药物的检测，Hopley等首次将此法用于粪便中轮状病毒和肠病毒抗原的检测。而CGIA用于手足口病(HFMD)的分型检测在国内尚未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种手足口病分性检测试剂盒及其制备方法。本专利技术提供的试剂盒能够直接即时(数分钟内)检测手足口病患儿咽拭子或粪便中病毒抗原，并能同时检测EV71和CA16两种病原体，对手足口病患儿分型诊断，且操作简单，不需特殊仪器，适合于各级医疗机构和疾病控制中心使用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案本专利技术提供了一种手足口病分型检测试剂盒，包括检测用具，检测用具依次包括加样区、检测区和质控区；检测区包括第一检测区和/或第二检测区，第一检测区包被肠病毒71型抗体，第二检测区包被柯萨奇病毒A16型抗体；质控区包被肠病毒71型和柯萨奇病毒A16型的混合物。 EV71是小RNA病毒科肠道病毒属的成员，其病毒基因组编码4个外壳蛋白，即VPI、VP2、VP3、VP4。这4个蛋白通过拼装成原聚体和亚单位，最终形成病毒外壳，VPI、VP2、VP3暴露在病毒表面，VP4则包埋在病毒内侧起连接作用，其抗原表位位于VPl、VP2、VP3上，而主要中和抗原决定簇则主要集中于外壳蛋白VPl上。CA16是单股正链RNA病毒，毒粒为二十面立体对称，呈球形，直径23-33nm，核衣壳裸露，衣壳蛋白包括VPl到VP4，其中VPl具有主要抗原决定簇，CA16VP1和EV71VP1是病毒血清型的分型依据在本专利技术的一些实施例中，本专利技术提供的手足口病分型检测试剂盒还包括检测容器，检测容器设置有与检测用具匹配的空腔，检测容器与检测用具可拆卸连接。在本专利技术的另一些实施例中，本专利技术提供的手足口病分型检测试剂盒，还包括标准区。在本专利技术的一些实施例中，标准区包括第一标准区和/或第二标准区，第一标准区与第一检测区对应，第二标准区与第二检测区对应。在本专利技术的另一些实施例中，本专利技术提供的手足口病分型检测试剂盒中，标准区设置于检测容器，第一标准区设置第一标记，第二标准区设置第二标记；第一标记指示肠病毒71型，第二标记指示柯萨奇病毒A16型。在本专利技术的另一些实施例中，本专利技术提供的手足口病分型检测试剂盒中还包括封闭液、洗涤液、胶体金标记的肠病毒71型抗体和胶体金标记的柯萨奇病毒A16型抗体。在本专利技术的另一些实施例中，本专利技术提供的手足口病分型检测试剂盒中，检测用具包括硝酸纤维素膜和吸水纸垫。本专利技术还提供了手足口病分型检测试剂盒用于检测肠病毒71型和/或柯萨奇病毒A16型的应用。本专利技术还提供了上述手足口病分型检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤获得肠病毒71型和柯萨奇病毒A16型；获得肠病毒71型抗体和柯萨奇病毒A16型抗体；获得胶体金标记的肠病毒71型抗体和胶体金标记的柯萨奇病毒A16型抗体；取硝酸纤维素膜和吸水纸垫制备获得检测用具；取检测用具在第一检测区包被肠病毒71型抗体，在第二检测区包被柯萨奇病毒A16型抗体；取检测用具在质控区包被肠病毒71型和柯萨奇病毒A16型的混合物；取检测用具与设置有和检测用具匹配的空腔的检测容器可拆卸连接。作为优选，包被肠病毒71型抗体具体为在检测用具第一检测区喷涂肠病毒71型抗体后直37 C保温30min后，直4 C 封保温。作为优选，包被柯萨奇病毒A16型抗体具体为在检测用具第二检测区喷涂柯萨奇病毒A16型抗体后直37 C保温30min后，直4 CS封保温。本专利技术还提供了基于上述的手足口病分型检测试剂盒的非疾病检测方法，包括如下步骤在加样区加入封闭液封闭后，加入待检样品，加入洗涤液洗涤后，分别加入金标记的肠病毒71型抗体和柯萨奇病毒A16型抗体,再加入洗漆液洗去未结合的金标记的肠病毒71型抗体和柯萨奇病毒A16型抗体，静置后观测结果；质控区显示红色质控线，测试结果有效；第一检测区出现红色检测线，待测样品为肠病毒71型抗原阳性；第二检测区出现红色检测线，待测样品为柯萨奇病毒A16型阳性；第一检测区或第二检测区均未出现红色检测线，待测样品为阴性。本专利技术利用胶体金免疫法(colloidal gold immunoassay,CGIA)双抗体夹心原理将柯萨奇病毒A16型膜壳蛋白I (CA16VP1)和肠病毒71型膜壳蛋白I (EV71VP1)的抗体包被于硝酸纤维膜中，用于检测手足口病患者咽拭子或粪便中不同类型的手足口病病毒抗原CA16VP1阳性则为柯萨奇病毒A16型感染，而EV71VP1阳性则为肠病毒71型感染。本专利技术提供的试剂盒能够直接即时(数分钟内)检测手足口病患儿咽拭子或粪便中病毒抗原，并能同时检测EV71和CA16两种病原体，对手足口病患儿分型诊断，且操作简单，不需特殊仪器，适合于各级医疗机构和疾病控制中心使用。本专利技术提供的试剂盒对手足口病分型检测，分别检测136例HFMD患J L和30例正常儿童粪便中柯萨奇病毒A16型(Coxsckievirus A16, CA16)和肠病毒71型(enterovirus71, EV71),以逆转录聚合酶链反应(RT — PCR)为标准,评价本专利技术提供的试剂盒的检测性能。本专利技术提供的试剂盒的检测方法与RT-PCR检测136例HFMD患儿粪便EV71阳性率分别为27. 2%和28. 6% ;本专利技术提供的试剂盒的检测方法与R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种手足口病分型检测试剂盒，其特征在于，包括检测用具，所述检测用具依次包括加样区、检测区和质控区；所述检测区包括第一检测区和/或第二检测区，所述第一检测区包被肠病毒71型抗体，所述第二检测区包被柯萨奇病毒A16型抗体；所述质控区包被肠病毒71型和柯萨奇病毒A16型的混合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马伟民，张永顶，马新民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：