等温扩增检测猴痘病毒的试剂及等温扩增检测猴痘病毒的方法技术

本发明专利技术提供了一种等温扩增检测猴痘病毒的试剂。它包括：（1）检测猴痘病毒的标准品，所述标准品为采用人工合成的基因片段，克隆入pGSI质粒，得到的重组质粒载体；所述基因片段的碱基序列如SEQ?ID?NO：1所示；（2）引物，包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP。本发明专利技术还提供了一种等温扩增检测猴痘病毒的方法，其利用上述试剂，可以快速准确地检测猴痘病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测猴痘病毒的试剂及方法，尤其涉及利用等温扩增技术检测猴痘病毒的试剂和方法。
技术介绍
猴痘病毒是一种人畜共患病，多发于中非和西非，1958年首次发现于猴子体内，上世纪70年代首次发现于人类感染猴痘病毒，2003年曾在美国威斯康辛州爆发，造成82人感染。猴痘病毒为双链DNA病毒，与天花病毒同属痘病毒科，感染的症状与天花相似，如发热、头痛、淋巴结肿大、咳嗽和全身极度疼痛，俗称“猴天花”，为未输入我国的危险病毒之一，可通过直接接触患者或者被感染的动物，或通过患者的体液传播，毒力强的病毒株有可能致死。天花疫苗对猴痘病毒有一定的抵抗能力，目前30岁以下人群均未接种天花疫苗，一旦 猴痘病毒传入将造成极大的危害。因此建立快速的猴痘病毒检测方法具有重要的现实意义。环介导等温扩增技术是一种高效、特异且不需要特殊仪器的核酸检测手段，针对靶基因的6个特征区域设计4种引物，利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶在恒温条件下催化新链合成，从而使靶基因高效扩增。它的产物是由多重复靶序列的茎-环状DNA和花椰菜状DNA所组成的混合物，在琼脂糖凝胶电泳上会呈现出LAMP所特有的阶梯状条带。LAM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种等温扩增检测猴痘病毒的试剂，其特征在于，它包括：（1）检测猴痘病毒的标准品，所述标准品为采用人工合成的基因片段，克隆入pGSI质粒，得到的重组质粒载体；所述基因片段的碱基序列如SEQ？ID？NO：1所示；（2）引物，其基因碱基序列：外引物F3：5′？CATTGATTTTTCGCGGGATA？3′；外引物B3：5′？TCCATCTCCTCCAGAATCTCC？3′；内引物FIP：5′？GTTGGTCTACGACAATGGATGCTCATCAGAATCTGTAGGCCGTGT？3′；内引物BIP：5′？TCCTTAGTCCAATGTTTTTAATAACCGAAAAATTTCTACGATCTAT...

【技术特征摘要】
1.ー种等温扩增检测猴痘病毒的试剂，其特征在于，它包括 (1)检测猴痘病毒的标准品，所述标准品为采用人工合成的基因片段，克隆入PGSI质粒，得到的重组质粒载体；所述基因片段的碱基序列如SEQ ID NO 1所示； (2)引物，其基因喊基序列 外引物 F3 :5' -CATTGATTTTTCGCGGGATA-3'；外引物 B3 :5' -TCCATCTCCTCCAGAATCTCC-3'； 内引物FIP 5' -GTTGGTCTACGACAATGGATGCTCATCAGAATCTGTAGGCCGTGT-3'； 内引物BIP 5' -TCCTTAGTCCAATGTTTTTAATAACCGAAAAATTTCTACGATCTATATTGACGAG-3'。2.ー种等温扩增检测猴痘病毒的方法，其特征在干 它的反应体系25μ 1，包括10Xbuffer2. 5μ 1，引物混合物I μ 1，模板DNAl μ 1，8UBstDNA 聚合酶 O. 8 μ 1，甜菜碱(8102レ 1，dNTP(10mM)2y 1，MgSO4 (IOOmM) I. 2 μ 1，I. 25 μ I荧光染料20XEva Green，_AddH20*i25yl ;反应体系中引物终浓度分别如下外引物F3和外引物B3各40pM,内引物FIP和内引物BIP各800pM ； 将上述反应体系在水浴箱上63 °C 90分钟，或者在荧光定量PCR仪上63 °C I分钟，9...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕沁风，郑伟，吴忠华，徐琦，罗鹏，何蕾，
申请(专利权)人：浙江国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：