结核分枝杆菌的核酸指纹特征图谱库及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种利用质谱技术快速分类和鉴定结核分枝杆菌的方法，包括PCR扩增、SAP酶消化、转录和核酸酶切、纯化、质谱仪检测等步骤。基于该方法，建立结核分枝杆菌的核酸指纹图谱数据库。根据实验产生的质谱峰图，可对待检样品中的结核分枝杆菌进行快速鉴定，结果可广泛运用于结核分枝杆菌分型和分类、及环境卫生和公共安全检疫等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种建立结核分枝杆菌核酸指纹图谱的方法，以及使用该方法，对结核分枝杆菌进行快速鉴定的方法。
技术介绍
结核病是一种严重危害人民健康的慢性传染病，目前全球有约20亿人被感染，每年新出现结核病患者约800-1000万，每年因结核病死亡人数约为200-300万。目前我国结核病年发病人数约为130万，因结核病死亡人数每年达13万，超过其它传染病死亡人数的总和。我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。我国结核病患病人数居世界第二位，仅次于印度。结核病是我国重点控制的重大疾病之一。 结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)简称为结核杆菌(tuberclebacilli)，属于分枝杆菌属，有多个分离株。实验室检测结核分枝杆菌是临床结核病诊断的主要依据。目前，传统检测结核分枝杆菌的主要方法为直接涂片法(萋钠法和荧光染色法)和培养法，萋钠涂片法虽简便易行，但检出率较低；荧光染色法虽检出率较高，但对设备要求亦高(需荧光显微镜)；培养法虽为金标准，但周期太长；均难以满足临床需要。近年来，实时动态本文档来自技高网...

【技术保护点】
结核分枝杆菌的核酸指纹特征图谱库及其用途，其特征在于，它至少包括如下步骤：（1）PCR反应：使用针对细菌的PCR通用引物，分别扩增多个细菌的核酸模板，得到含扩增目标区域的PCR产物；（2）SAP酶消化：用碱性磷酸酶（SAP酶）处理步骤（1）得到的PCR产物；（3）转录和核酸酶切：使用特定的转录和内切酶，分别在一个反应体系中，对步骤（2）得到的各个细菌的消化产物进行转录和核酸酶切，获得一系列长度不一、丰度不一的核酸片段；（4）纯化：使用树脂处理步骤（3）得到的酶切产物；（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物上点在含有基质的靶片上，上质谱仪进行检测，得到结核分枝杆菌的特征核酸指纹谱图。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马庆伟，赵洪斌，张海燕，赵艳梅，
申请(专利权)人：向华，
类型：发明
国别省市：