梅毒螺旋体tmpA基因FQ-PCR检测试剂盒及其制备，涉及一种试剂盒。试剂盒设有DNA提取试剂瓶、耐热DNA聚合酶瓶、PCR反应液瓶、标准品瓶、质控品瓶和包装盒；DNA提取试剂瓶设有蛋白酶K瓶、裂解液瓶、无水乙醇瓶、抑制物去除液瓶、第1清洗缓冲液瓶、洗脱液瓶、第2清洗缓冲液瓶和含收集管的离心柱；标准品瓶设有6个含tmpA基因的标准品质粒瓶；质控品瓶设有阴性质控品瓶和阳性质控品瓶。先筛选靶基因，再构建tmpA基因标准品质粒，制作tmpA基因检测试剂标准曲线后，先后制备PCR反应液、耐热DNA聚合酶，建立样品处理方法后，制备质控品，最后完成梅毒螺旋体tmpA基因FQ-PCR检测试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种试剂盒，尤其是涉及一种梅毒螺旋体tmpA基因FQ-PCR检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Treponema pallidum, TP)引起的性传播疾病，其病原体是梅毒螺旋体，属螺旋体科。梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或者胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液播散全身，使机体几乎所有的组织及器官受累，临床表现为全身性的，可分为不同临床阶段，包括一期、二期、三期和潜伏期。世界卫生组织(WHO)曾乐观地预言(WH0. Global prevalence andincidence of selected curable sexually transmitted infections:Overview andestimates · Geneva: WHO, WH0/HIV/AIDS, 2001:1-30.):“ 由于有高灵敏度检测方法和高效的治疗方案，梅毒是一种能够通过公共卫生措施得到成功控制的性传播性疾病”。遗憾的是，由于至今仍然缺乏高灵敏的检测方法和高效的治疗方案，梅毒依然是严重危害人类健康的全世界范围的公共卫生问题。中国疾病控制中心的官方数据显示2010年我国梅毒(Syphilis)的发病数为375309例，比2009年同期增长24. 50%。报告发病数仅次于病毒性肝炎和肺结核居第三位，居于性传播疾病首位(中国疾控中心http://www.chinacdc. net. cn)。近年来,有关梅毒与艾滋病之间存在着互相促进的研究结果(Buchacz, K. , Klausner, J. D. , Kerndt, P. R. , et al. McElroy, P. D. and Schwendemann, J. HIVincidence among men diagnosed with early syphilis in Atlanta, San Francisco, andLos Angeles, 2004to 2005 · Jaids-J Acq Tmm Def,2008, 47(2):234-240. Ghanem, K.G. , Erbelding, E. J. , Wiener, Z. S. , et al. Serological response to syphilis treatmentin HIV-positive and HIV-negative patients attending sexually transmitteddiseases clinics . Sex Transm Infect, 2007，83 (2) :97-101.),使得梅毒的控制越发困难而且重要。无疑，人们对梅毒的防控过于乐观，对梅毒的认识远远不够。尽管青霉素成功应用于治疗各期梅毒已经有50年历史，但治疗失败可见于任何一种被推荐的治疗方案。林丽蓉等(林丽蓉，杨波，潘锡涛，等.潜在的血源传播患者梅毒血清学检测方法的选择.中华医院感染学杂志，2010，. 20(10) :1491-1494)在对健康体检者、门诊患者和潜在血源传播患者梅毒血清学调查中均发现，这些人群存在一定比例的梅毒感染率，推测本地区人群梅毒的检出率应该在2. 59%以上。显然，梅毒感染者已经较广泛地存在于普通人群中。梅毒正以过去500年任何国家和地区都未曾有过的速度在中国传播，由于存在隐性感染以及无法统计的私人诊所患者患病率，目前看到的梅毒发病率或许只是梅毒现状的冰山一角(Lin, L. R. , Fu, Z. G. , Dan, B. , Jing, et al. Developmentof a colloidal gold—immunochromatography assay to detect immunoglobulin Gantibodies to Treponema pallidum with TPNl7and TPN47. Diagn Micr InfecDis, 2010，68(3) : 193-200. Tucker JD, C. X. , Peeling RW. Syphilis and socialupheaval in china. N Engl J Med, 2010, 362(18):1658-1661. Chen, Z. Q. , Zhang, G.C. , Gong, X. D. , Lin, C. , Gao, X. , Liang, G. J. , Chen, X. S. , and Cohen, M. S. Syphilis inchina:Results of a national surveillance programme. Lancet, 2007, 369:132-138.Li-Rong Lin,Man-Li Tong,Zuo-Gen Fu,et al. Evaluation of a colloidalgoId-immunochromatography assay in the detection of Treponema Pallidm specificIgM antibody in syphilis serofast reaction patients:a serologic marker for therelapse and infection of syphilis. Diagnostic Microbiology and InfectiousDisease. 2011, 70:10-16)。实验室检查是诊断梅毒必不可少的方法，也是判断疗效和复发的重要依据，包括暗视野显微镜检查和血清学试验。梅毒螺旋体感染早期，梅毒抗体还未产生或含量较低时，暗视野显微镜查找螺旋体成为最早的实验室诊断方法，但敏感度较低，且易受肛门周围非致病螺旋体的影响而产生假阳性。梅毒螺旋体尚不能进行体外培养，梅毒诊断 与流行病学调查主要依赖于血清学试验，包括特异性抗体和反应素检测两大类型。反应素检测对早期梅毒检测灵敏度不高，而且生物假阳性率较高，是主要用于疗效观察的一项血清学指标(林丽蓉，但冰，付左根，等.潜在血源传播患者梅毒血清学TRUST/TPPA与IgM抗体联合检测.中国皮肤性病学杂志.2010，152(05):446-448)。梅毒特异性抗体检测的敏感性和特异性均较反应素高。但是，梅毒特异性抗体检测仍然存在着灵敏度不足的缺陷，尤其是早期梅毒患者抗体滴度较低。如果能建立一种方法能灵敏、特异和快速检测到梅毒患者各类组织、体液中存在梅毒螺旋体，能证明梅毒螺旋体存在，那么这些棘手问题将迎刃而解。兔睾丸是梅毒螺旋体易感器官，少量梅毒螺旋体即可导致兔睾丸炎，因此，兔感染试验被视为梅毒螺旋体检测的最灵敏的方法。然而，兔感染试验操作繁琐，观察时间要求3个月，甚至更长时间才能得到结果，临床可操作性差。PCR扩增技术以梅毒螺旋体特异性的基因片段做为扩增模板，通过指数扩增实现了病原体的快速检测，具有高效、灵敏和特异等优势。从理论上分析，通过优化、改良PCR扩增技术，其检测的灵敏度和特异性可以媲美兔感染试验，而检测时间仅仅需要2个小时(H本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘莉莉，林丽蓉，张长弓，童曼莉，徐竟波，杨天赐，
申请(专利权)人：厦门大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：
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