本发明专利技术提供了免疫特异性识别人９整联蛋白的人源化抗体。这些抗体中的一些抑制９整联蛋白的生物学功能，由此对与９整联蛋白有关的各种病症或疾病（包括癌症，例如癌细胞的生长和转移，和炎性疾病，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、肝炎、支气管哮喘、纤维化、糖尿病、动脉硬化、多发性硬化、肉芽肿、炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、自身免疫性疾病、等等）展现出治疗效果。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及免疫特异性识别人α 9整联蛋白的人源化抗体及其对与α 9整联蛋白有关或牵涉α 9整联蛋白的各种疾病或病症(包括癌症、炎性疾病、自身免疫性疾病、由α 9 整联蛋白诱发的疾病状况、等等)的治疗和诊断用途。2.
技术介绍
由一组称作整联蛋白的细胞表面受体介导，细胞粘附于胞外基质(下文缩写为 ECM)。整联蛋白通过形成α和β链的1 1异二聚体来执行其功能。迄今为止，已经鉴定并确认至少18类α链、8类β链和对类α β异二聚体。已知每种整联蛋白识别一种特定的配体。整联蛋白根据其配体特异性或功能而分类入亚家族中，并分成胶原受体、层粘连蛋白受体、识别存在于纤连蛋白、玻连蛋白、等中的Arg-Gly-Asp (RGD)序列的RGD受体、和仅存在于白细胞中的白细胞特异性受体(Hynes, R. 0.，2002，Integrins bidirectional, Allosteric Signaling Machines. Cell 110 :673-87 ；Miyasaka, Μ. ,2000, New edition of Adhesion Molecule Handbook，Shujunsya)。α 4和α 9整联蛋白是不属于任何这些类型并称作α 4整联蛋白亚家族的亚家族的成员(Elise L. Palmer, Curzio Rfiegg，Ronald Ferrando, Robert Pytela, Sheppard D.,1993, Sequence and Tissue Distribution of the Integrin α 9 Subunit, a Novel Partner of β 1 That Is Widely Distributed in Epithelia and Muscle. The Journal of Cell Biology, 123 :1289-97)。同时，迄今为止， 过去认为ECM仅充当细胞间的粘合物质。现在已经变得清楚的是，整联蛋白介导的ECM-细胞相互作用显著牵涉调节细胞的生长、粘附、运动、等，而且与疾病的发作(包括癌症的进展、炎症的恶化、等)有关。例如，作为ECM之一的骨桥蛋白(下文缩写为0ΡΝ)是一种具有约41kDa分子量的分泌性、酸性磷酸化糖蛋白，而且是一种在母乳、尿液、肾小管、破骨细胞、成骨细胞、巨噬细胞、激活的T细胞、肿瘤组织、等等中广泛观察到其表达的分子。OPN具有粘附序列，即在其分子中央的GRGDS(SEQ IDNO :1)、在人OPN中的SWYGLR(SEQ ID NO 2)序列或小鼠OPN中的SLAYGLR(SEQ ID NO 3)序列，和与其极其接近的凝血酶切割位点，并经由GRGDS (SEQ ID NO 1)序列结合RGD整联蛋白或经由SVVYGLR (SEQ IDNO 2)序列或SLAYGLR (SEQ ID NO 3)序列结合α4(α4β 1)禾口 α9(α9β 1)整联蛋白。WO 02/081522披露了使用OPN敲除小鼠或针对OPN的中和性抗体通过抑制OPN功能实现的对类风湿性关节炎或肝炎的治疗效果。此外，此公开文本披露了 SVVYGLR(SEQ ID NO 2)序列由于识别α9和α 4整联蛋白而对于炎性疾病的发病机制是至关重要的，并且 OPN的受体在免疫活性细胞等等中表达且与炎性疾病有关。已经找到了结合谱的差异，其在于α 4β 1既结合未经凝血酶切割的0ΡΝ(未切割的0ΡΝ)又结合经凝血酶切割的OPN (经切割的0ΡΝ)的N端片段，而α 9 β 1仅结合经切割的OPN(Y. Yokosaki等，(1999)The Journal of Biological Chemistry, 274 :36328-36334 ； P. Μ. Green 等，O001)raBS Letters, 503 :75-79 ；S. Τ. Barry 等，OOOO) Experimental CellResearch, 258 :342-351)。除了 OPN以外，α4和α9整联蛋白共享许多共同配体。已知的配体有纤连蛋白的EDA域、前肽-von Willebrand因子(pp-vWF)、组织转谷氨酰胺酶(tTG)、血液凝固因子XIII、血管细胞粘附分子-I(VCAM-I)等。另外，已知纤连蛋白的CS-I域、 MadCAM-I (α 4β 7)、等为受到α 4整联蛋白特异性识别的配体。已知生腱蛋白-C、纤溶酶、 等为受到α9整联蛋白特异性识别的配体。整联蛋白亚基α 9、α 4和β 1的氨基酸序列是众所周知的。例如，在GenBank，人 α 9 登记为 NM_002207，小鼠 α 9 为 NM_133721，人 α 4 为 NM_000885，小鼠 α 4 为 NM_010576， 人β 1为Χ07979，而小鼠β 1为ΝΜ_010578。还已知这些整联蛋白在氨基酸序列方面在物种间具有高度相似性。3.专利技术概述虽然目前已知许多用于治疗癌症、炎性疾病和自身免疫性疾病的药物，但是期望开发出对癌症、炎性疾病和自身免疫性疾病具有更为改善的治疗效果的预防和/或治疗剂等。本专利技术部分基于本专利技术人的发现，即针对α9整联蛋白的特异性抑制性抗体具有抑癌和消炎效果。先前，本专利技术人分离出免疫特异性识别人α 9整联蛋白并由杂交瘤克隆Κ33Ν(保藏登录号FERM ΒΡ-10830)生成的小鼠单克隆抗体。在本文中，该杂交瘤克隆名称与由该克隆生成的单克隆抗体的名称可互换使用。小鼠抗人α 9整联蛋白抗体是IgGl同种型的。该单克隆抗体抑制人和/或小鼠α 9整联蛋白与α 9整联蛋白的配体，诸如骨桥蛋白之间的结合。如此，该抗α 9整联蛋白抗体抑制α 9整联蛋白的功能，而且对癌症，例如癌细胞的生长或转移，和对炎性疾病，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、肝炎、支气管哮喘、纤维化、糖尿病、动脉硬化、多发性硬化、肉芽肿、炎性肠病(溃疡性结肠炎和克罗恩(Crohn)氏病)、自身免疫性疾病、由α 9整联蛋白诱发的疾病状况、等等展现出治疗效果。此外，本专利技术的抗α 9整联蛋白抗体可以作为体内诊断剂用于检测受试者中的 α 9整联蛋白表达的存在和水平，由此诊断牵涉α 9整联蛋白的病症或疾病。然而，因为该单克隆抗体是小鼠起源的，其在人中的免疫原性所致的可能的不利影响已经阻碍了其直接应用于人的诊断或治疗用途。为了降低免疫原性，本专利技术人已经制备了人源化抗体，其具有与衍生所述人源化抗体的初始小鼠抗α 9整联蛋白抗体展现的生物学活性对应的生物学活性。因而，本专利技术提供了免疫特异性识别人α 9整联蛋白的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含部分自非人起源衍生和部分自人起源衍生的抗原结合区。在一个具体的实施方案中，本专利技术的人源化抗体或其抗原结合片段包含自非人来源(供体)，诸如Κ33Ν 单克隆抗体衍生的互补决定区(CDR)和自人来源(接受体)衍生的框架区(FR)。在一个实施方案中，所述人源化抗体或其抗原结合片段抑制人α9整联蛋白与人α9整联蛋白的配体之间的结合。在一个具体的实施方案中，所述免疫特异性识别人α 9整联蛋白的人源化抗体或其抗体结合片段包含(i)重链(H链)，其包含至少一种自人H链的可变区(V区)衍生的 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种免疫特异性识别人α９整联蛋白的人源化抗体或其抗原结合片段，其包含：（ｉ）Ｈ链，该Ｈ链包含至少一种自人抗体的ＶＨ区衍生的ＦＲＨ和至少一种自免疫特异性识别人α９整联蛋白的非人抗体的至少一种ＣＤＲＨ衍生的ＣＤＲＨ；或（ｉｉ）Ｌ链，该Ｌ链包含至少一种自人抗体的ＶＬ区衍生的ＦＲＬ和至少一种自免疫特异性识别人α９整联蛋白的非人抗体的至少一种ＣＤＲＬ衍生的ＣＤＲＬ；或（ｉｉｉ）上文的（ｉ）和（ｉｉ）两者。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S库马，
申请(专利权)人：株式会社遗传科技，
类型：发明
国别省市：JP
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